蛋白质的盐析作用

【实验目的】

1．掌握盐析及分段盐析的原理和方法。

2．掌握离心机的工作原理并学会使用离心机。

【实验原理】

在蛋白质溶液中加入适量高浓度的中性盐，使蛋白质从溶液中析出的过程称为蛋白质的盐析作用。当高浓度的中性盐加入蛋白质溶液后，由于中性盐是强的电解质，在水溶液中的溶解度较大，因此可与蛋白质争夺水分子，从而破坏蛋白质分子表面的水化膜，使蛋白质分子脱去水化膜；同时中性盐解离产生的离子可中和蛋白质分子所带的电荷。因此稳定蛋白质胶体溶液的因素遭到破坏，蛋白质溶解度下降而从溶液中沉淀出来。由于盐析沉淀出的蛋白质分子仍然保持其天然结构状态，所以盐析法一般只沉淀蛋白而不使蛋白变性。降低盐的浓度，蛋白质可复溶于原来的溶剂中。

实验中常用的中性盐有硫酸铵、氯化钠和硫酸钠等。沉淀不同的蛋白质所选用的中性盐的种类和浓度也不相同。

不同蛋白质盐析时，所需要的中性盐浓度和溶液的pH也不相同。例如在pH为7．0的半饱和硫酸铵溶液中，血清球蛋白即可沉淀，而当硫酸铵溶液达到饱和时，血清清蛋白才沉淀析出。因此，在沉淀蛋白质的过程中，可以通过改变盐溶液浓度的方法使不同的蛋白质分段析出，使混合蛋白分离，称为分段盐析。

【实验器材】

试管；试管架；玻璃棒；台式离心机；蛋清。

【实验试剂】

1．蛋白质氯化钠溶液：取生蛋清10ml，加蒸馏水100ml和饱和氯化钠溶液50ml，充分混匀后，离心或过滤弃去不溶物即可。

2．硫酸铵粉末。

3．饱和硫酸铵溶液。

4．饱和氯化钠溶液。

【实验方法】

1．取一支小试管加入2ml蛋白质氯化钠溶液和2ml饱和（NH4）2SO4溶液，混匀，静置10min，球蛋白即沉淀析出。2　000rpm离心10min，分离上清液。

2．取上清液2ml于另一支小试管中，加入（NH4）2SO4粉末，边加边用玻璃棒充分搅拌，直到（NH4）2SO4粉末不再溶解达到饱和状态为止，静置约10min，2　000rpm离心10min，弃去上清液，沉淀即为清蛋白。

3．向上述两个离心管的沉淀中各加蒸馏水1ml，搅拌，观察沉淀是否溶解。解释原因并得出相应的结论。

【注意事项】

沉淀清蛋白时，一定要边加（NH4）2SO4边搅拌，直到产生沉淀；要注意观察（NH4）2SO4的量不能过量，否则清蛋白将不能沉淀。这是因为清蛋白比重较小，在浓度较大的盐溶液中不易沉淀的缘故。

（朱海英）