胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇（－－法）

【实验目的】

了解血清总胆固醇测定的方法及临床意义。

【实验原理】

血清中总胆固醇包括游离胆固醇和胆固醇酯两部分。血清中胆固醇酯可被胆固醇酯酶（CHE）水解为游离胆固醇和游离脂肪酸，胆固醇在胆固醇氧化酶（cholesteroloxidase，COD）的氧化作用下生成△4－胆甾烯酮和H2O2，H2O2经过氧化物酶（POD）催化下，分解出氧，使无色的4－氨基安替比林（4－AAP）与酚（三者合称PAP）偶联生成红色醌亚胺（即Trinder反应）。醌亚胺的最大吸收峰在500nm左右，吸光度与标本中的胆固醇含量成正比，与经过同样处理的胆固醇校准品进行比较，即可计算出样品中的胆固醇含量。反应式如下：

【实验器材】

分光光度计；恒温水浴锅；样品（血清）。

【实验试剂】

试剂盒组成及参考浓度：

1．胆固醇液体酶试剂组成

GOOD－S缓冲液（pH6．7）　　　50mmol／L

胆固醇酯酶　　　　　　　　　　≥200U／L

胆固醇氧化酶　　　　　　　　　≥100U／L

过氧化物酶　　　　　　　　　　≥3　000U／L

4－AAP　　　　　　　　　　　　0．3mmol／L

苯酚　　　　　　　　　　　　　5mmol／L

2．胆固醇校准溶液117mmol／L（200mg／dl）　精确称取胆固醇200mg，用异丙醇配成100ml溶液，分装后，4℃保存，临用取出。也可用定值的参考血清作标准。测定前根据说明书配制工作液。

【实验方法】

1．取干燥试管3支，按附表17操作：

附表17　CEH－COD－PAP法测定血清总胆固醇操作步骤

混匀后，置37℃水浴保温5min，用分光光度计，于500nm波长处以空白管调零，读取各管光吸收值，按标准液（或定值血清）为标准计算结果。

如果使用自动生化分析仪，可根据上述“测定参数”在仪器上编制程序进行直接测定。

2．计算

【注意事项】

1．样品中胆固醇浓度大于13mmol／L时，可用生理盐水稀释后再重新测定，结果乘以稀释倍数。

2．轻度溶血对测定结果无影响，明显溶血可使结果增高。

【临床意义】

正常参考范围：成人2．85～5．69mmol／L（110～220mg／dl）；儿童3．12～5．2mmol／L（100～200mg／dl）。

1．高胆固醇血症　常见于动脉粥样硬化、家族性高胆固醇血症、肾病综合征、甲状腺功能减退等。

2．低胆固醇血症　常见于低蛋白血症、营养不良、慢性消耗性疾病、甲亢等。

（孙秀玲）