一、目的要求
1.了解高速冷冻离心机的结构、使用方法及注意事项。
2.掌握生物物质、微生物菌体离心分离的原理。
二、实验原理
高速冷冻离心机是利用离心力对混合溶液进行分离和沉淀的一种专用仪器,在实验室分离和制备工作中是必不可少的工具,其最高速度可以达到25 000 r/min,最大离心力可达89 000 g。这类离心机通常带有冷却离心腔的制冷设备,温度控制是由装在离心腔内的热电偶检测离心腔的温度。高速冷冻离心机有多个内部可变换的转子,它们大多用于收集微生物菌种细胞碎片以及一些沉淀物等。
三、仪器与试剂
大肠杆菌发酵液、天平、高速冷冻离心机(图1-1-1)、离心管。
图1-1-1 高速冷冻离心机
四、实验操作与步骤
(1)使用前先检查离心机开关状态,离心管是否泄漏。
(2)选择与离心管匹配的转子安装到离心腔内承载转子的轴上。
(3)接通电源,打开电源开关。
(4)将待离心的发酵液装入合适的离心管中,装液量不宜超过管体积的 2/3,盖上离心管盖,精密平衡离心管,并对称地放入转子中。
(5)选择离心温度、转子类型、转速和离心时间。
(6)完成设置以后,按起动开关,并观察离心机上的各个指示是否正常工作。
(7)离心结束后,关闭冷冻开关、电源开关、切断电源。
(8)将转子取出并擦净,将离心机的盖子敞开放置。
(9)收集离心物,洗净离心管。
五、实验说明
(1)高速冷冻离心机的转子是镶置在一个较细的轴上,要求精密的平衡离心管及内含物。
(2)当转子只是部分装载时,管子必须相互对称地放在转子上。
(3)装载溶液时,要根据离心管的具体操作说明进行,要根据离心液体的性质、体积选择合适的离心管,液体不得装得过多,以防离心时甩出,造成转子生锈或者腐蚀。
(4)每次使用时,要仔细检查转子,及时清洗、擦干,转子是离心机中须重点保护的部件,搬动时不能碰撞,避免造成伤痕。转子长时间不用时,要涂一层光蜡保护。
(5)转子在使用前应放置在冰箱或置于离心机的转子室内预冷。
(6)离心过程中不得随意离开,应随时观察离心机上仪表是否正常工作,并注意声音有无异常,以便及时排除故障。
(7)每个转子各有其最高允许速度,使用时注意不能过速使用。
六、思考题
1.影响离心分离的因素有哪些?
2.如何进行密度梯度离心?
3.离心操作除能进行液—固分离以外,还能在哪些方面进行应用?
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