一、目的要求
让学生了解香菇多糖的理化性质及提取工艺流程，掌握真空浓缩技术。
二、实验原理
香菇是一种药食两用真菌，具有提高免疫力、抗癌、降糖等多种生理功能。水溶性多糖作为香菇主要活性成分之一，主要以β-1，3-葡聚糖的形式存在，分子量从几万到几十万不等。通过有机溶剂提取，用真空浓缩技术进行分离提取。
三、仪器与试剂
鼓风干燥器如图3-1-1所示。
原料：干香菇1 kg。
试剂：氯仿、正丁醇、医用纱布、浓硫酸、重蒸酚、工业酒精。
仪器：组织捣碎机、水浴锅、旋转蒸发器、1 cm比色皿、751分光光度计、电子天平、台式离心机、试管、量筒、烧杯、玻璃棒。
图3-1-1 鼓风干燥器
四、实验操作与步骤
（1）称取1 kg干香菇切成小块，以1∶10（重量比）加入水，用组织捣碎机进行均质。
（2）取200 m L均质液放入1 L烧杯中，再加入300 m L蒸馏水，加热至沸后，温火煮沸1 h （注意：煮沸过程中用玻璃棒不断搅拌，以免烧杯底部发生糊结；并间歇加入少量水，使杯内液体体积保持在500 m L左右）。
（3）加热完毕后，将杯内液体用8层纱布过滤，除去残渣，上清液转入另一烧杯中。
（4）将上清液倒入圆底烧瓶中，在旋转浓缩仪上进行浓缩，浓缩条件为-0.1 MPa、60℃，浓缩液体积至100 m L左右停止。
（5）将浓缩液在1×10 000 g离心10 min，将上清液转入另一烧杯，除去残渣。
（6）上清液中加入等体积的氯仿正丁醇溶液（体积比为4∶1），搅拌5 min，静置30 min。
（7）将混合液体在1×5 000 g下离心20 min，分离水相。
（8）在水相中加入终浓度为80%的酒精，搅拌均匀，静置20 min，1×5 000 g下离心10 min。
（9）取出沉淀物，使用丙酮、乙醚分别脱水，放入已称重的干燥表面皿中，在真空干燥箱中80℃下真空干燥。
（10）干燥后，称重，计算多糖的产率。
（11）准确称取干燥后多糖20 mg于500 m L容量瓶中，加水定容。
（12）取定容液2 m L加入6%苯酚1 m L，混匀，再加入浓硫酸5 m L，混匀，放置20 min后，于490 nm测吸光度。
（13）葡萄糖标准曲线的制定：准确称取葡萄糖20 mg定容于500 m L容量瓶中，分别取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6 m L和1.8 m L，补水至2 m L，依（12）步骤分别测吸光度，根据葡萄糖浓度和吸光度绘制标准曲线。
（14）根据香菇多糖吸光度和葡萄糖标准曲线，计算多糖纯度。
五、实验说明
（1）计算多糖的提取率和纯度。
（2）加入等体积的氯仿正丁醇溶液要混合均匀，并离心去除杂蛋白。
（3）丙酮、乙醚脱水要彻底并进行真空干燥，因为多糖很容易被氧化。
六、思考题
1．利用所学知识，分析多糖沉淀的原理。
2．日常生活中的多糖包括哪些？举几例说明。
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