用荧光分析法测定饮料中的奎宁

一、 实验目的

（1） 了解荧光分析法的基本原理， 掌握荧光分析法的实验技术。

（2） 掌握用荧光分析法测定饮料中的奎宁的方法。

二、 实验原理

奎宁（C20H24N2O2，M＝324.43g·mol-1）是从金鸡纳树皮中提取出来的生物碱，多年来一直被用作抗疟疾药品。 奎宁尽管不是治疗疟疾的药物， 却能够减轻疟疾的症状， 通常的药用形式是二盐酸奎宁或二水合硫酸奎宁， 二水合硫酸奎宁的分子形式为（C20H24N2O2）2·H2SO4·2H2O，M＝782.94 g·mol-1。奎宁的基本结构如图3-6所示。

图3－6 奎宁的基本结构

在稀盐酸溶液中， 奎宁具有很强的荧光， 据此可以检测痕量的奎宁。在0.05mol·L-1的H2SO4溶液中，奎宁有两个激发峰， 分别位于250nm和350nm波长处， 荧光发射峰位于450nm波长处。

三、 仪器及试剂

1. 仪器

（1） F-4500型荧光分光光度计（日本Hitachi公司）；

（2） 25m L比色管；

（3） 分度吸量管。

2. 试剂

（1）0.05mol·L-1的H2SO4溶液；

（2） 奎宁储备液（100μg·m L-1）：称量120mg二水合硫酸奎宁或100mg奎宁，以0.05mol·L-1的H2SO4溶液溶解并定容于1000m L容量瓶，避光保存，使用时，以0.05mol·L-1的H2SO4溶液稀释成10.0μg·m L-1的工作液。

四、 实验内容

（1） 奎宁标准溶液的配制： 向一系列25 m L容量瓶中准确加入0.25 m L、 0.5 m L、1.0m L、1.5m L、2.0m L、2.5m L10.0μg·m L-1的奎宁工作液，以0.05mol·L-1的H2SO4溶液定容。 在选定的波长激发， 测量波长450nm处的荧光强度， 制作标准工作曲线。

（2）检测限的测定：取上述第一份奎宁标准溶液，以0.05mol·L-1的H2SO4溶液按照10倍逐级稀释，直至获得的荧光值与0.05mol·L-1的H2SO4溶液的值相当。该浓度即硫酸奎宁溶液的检测限。

（3） 饮料中奎宁浓度的测定： 从指导教师处领取配制好的硫酸奎宁溶液（60～80μg· m L-1），以0.05mol·L-1的H2SO4溶液稀释一定倍数。在标准工作曲线条件下测定其荧光强度， 并从标准工作曲线获得其准确浓度。

五、 数据处理

（1） 以荧光强度为纵坐标， 以奎宁的浓度为横坐标制作校准曲线， 并获得线性拟合方程以及相关系数。

（2） 计算奎宁的检测限。

（3） 计算未知样品中奎宁的浓度。

思 考 题

1. 如何找到激发波长？

2. 荧光光谱仪与分光光度计的结构及操作有何异同？