液相色谱仪的基本组成

1. 高压输液系统

高压输液系统由溶剂贮存器、 高压输液泵、 梯度洗脱装置和压力表等组成。

1） 溶剂贮存器

溶剂贮存器一般由玻璃、 不锈钢或氟塑料制成， 容量为1～2L， 用来贮存足够数量、 符合要求的流动相。

2） 高压输液泵

高压输液泵是高效液相色谱仪中的关键部件之一， 其功能是将溶剂贮存器中的流动相以高压形式连续不断地送入液路系统， 使样品在色谱柱中完成分离过程。 由于液相色谱仪所用色谱柱径较细， 所填固定相粒度很小， 因此， 其对流动相的阻力较大， 为了使流动相能较快地流过色谱柱， 就需要高压泵注入流动相。

对泵的要求是： 输出压力高、 流量范围大、 流量恒定、 无脉动， 流量精度和重复性为0.5％左右。 此外， 泵还应耐腐蚀， 密封性好。

高压输液泵按其性质可分为恒压泵和恒流泵两大类。

恒流泵是能给出恒定流量的泵， 其流量与流动相黏度和柱渗透无关。

恒压泵可保持输出压力恒定， 而流量随外界阻力的变化而变化， 如果系统阻力不发生变化， 恒压泵就能提供恒定的流量。

3） 梯度洗脱装置

梯度洗脱就是在分离过程中使两种或两种以上不同极性的溶剂按一定程序连续改变它们之间的比例， 从而使流动相的强度、 极性、 p H值或离子强度相应地变化， 达到提高分离效果、 缩短分析时间的目的。

梯度洗脱装置分为两类：

一类是外梯度装置（又称低压梯度）， 流动相在常温常压下混合， 用高压泵压至柱系统，仅需一台泵即可。

另一类是内梯度装置（又称高压梯度）， 将两种溶剂分别用泵增压后， 按电器部件设置的程序， 注入梯度混合室混合， 再输至柱系统。

梯度洗脱的实质是通过不断地变化流动相的强度， 来调整混合样品中各组分的k值， 使所有谱带都以最佳平均k值通过色谱柱。 它在液相色谱法中所起的作用相当于气相色谱法中的程序升温， 所不同的是， 在梯度洗脱中溶质k值的变化是通过溶质的极性、 p H值和离子强度来实现的， 而不是借改变温度（温度程序）来达到的。

2. 进样系统

进样系统包括进样口、 注射器和进样阀等， 它的作用是把分析试样有效地送入色谱柱上进行分离。

3. 分离系统

分离系统包括色谱柱、 恒温器和连接管等部件。 色谱柱一般用内部抛光的不锈钢制成。其内径为2～6mm， 柱长为10～50cm， 柱形多为直形， 内部充满微粒固定相。 柱温一般为室温或接近室温。

4. 检测器

检测器是液相色谱仪的关键部件之一。 对检测器的要求是： 灵敏度高、 重复性好、 线性范围宽、 死体积小以及对温度和流量的变化不敏感等。

在液相色谱法中， 有两种类型的检测器， 一类是溶质性检测器， 它仅对被分离组分的物理或物理化学特性有响应， 属于此类检测器的有紫外吸收检测、 荧光检测、 电化学检测器等； 另一类是总体检测器， 它对试样和洗脱液总的物理和化学性质响应， 属于此类检测器的有示差折光检测器等。

目前应用较多的有紫外吸收检测器、 荧光检测器、 电化学检测器、 化学发光检测器、 蒸发光散射检测器、 安培检测器及示差折光检测器等。