分光光度法同时测定维生素和维生素

一、目的及要求

1.进一步熟悉UV9600型双光束紫外-可见分光光度计。

2.学习在紫外光谱区同时测定双组分体系——维生素C和维生素E。

二、实验原理

维生素C（抗坏血酸）和维生素E（α-生育酚）起抗氧剂作用，即它们在一定时间内能防止油脂酸败。两者结合在一起比单独使用的效果更佳，因为它们在抗氧化性能方面是“协同的”。因此，它们作为一种有用的组合试剂用于各种食品。

抗坏血酸是水溶性的，α-生育酚是酯溶性的，但它们都能溶于无水乙醇，因此，能用在同一溶液中测定双组分的原理来测定它们。

三、仪器与试剂

1.仪器

UV9600型双光束紫外-可见分光光度计

石英比色皿2个

50 mL容量瓶9只

10 mL吸量管2支

2.试剂

抗坏血酸：称取0.013 2 g抗坏血酸溶于无水乙醇中，并用无水乙醇定容至1 000 mL（7.50×10－5mo1／L）

生育酚：称取0.048 8 gα-生育酚溶于无水乙醇中，并用无水乙醇定容至1 000 mL（1.13×10－4mo1／L）

无水乙醇

四、实验步骤

1.配制标准溶液

（1）分别取抗坏血酸贮备液4.00 mL、6.00 mL、8.00 mL、10.00 mL于4只50 mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀。

（2）分别取α-生育酚贮备液4.00 mL、6.00 mL、8.00 mL、10.00 mL于4只50 mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀。

2.绘制吸收光谱

以无水乙醇为参比，在220～320 nm处，以5 nm为间隔，测绘出抗坏血酸和α-生育酚的吸收光谱。并确定最大吸收波长λ1和λ2。

3.绘制标准曲线

以无水乙醇为参比，在波长λ1和λ2处分别测定步骤1配制的8种标准溶液的吸光度。

4.未知液的测定

取未知液5.00 mL于50 mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀。在λ1和λ2分别测其吸光度。

五、数据处理

1.绘制抗坏血酸和α-生育酚的吸收光谱，确定λ1和λ2。

2.分别绘制抗坏血酸和α-生育酚在λ1和λ2的4条标准曲线，求出4条直线的斜率。

3.计算未知液中抗坏血酸和α-生育酚的浓度。

六、注意事项

抗坏血酸会缓慢地氧化成脱氢抗坏血酸，所以必须每次实验时配制新鲜溶液。

七、思考题

1.写出抗坏血酸和α-生育酚的结构式，并解释一个是“水溶性”，一个是“酯溶性”的原因。

2.使用本方法测定抗坏血酸和α-生育酚是否灵敏？解释其原因。