【摘要】：层析是分离、纯化蛋白质的重要方法之一。层析种类很多，有离子交换层析、凝胶过滤与亲和层析等。例如阴离子交换层析分离蛋白质时，将阴离子交换树脂颗粒填充在层析管内，由于阴离子交换树脂颗粒带正电荷，能吸引溶液中的蛋白质阴离子。蛋白质溶液加于柱的顶部，任其往下渗漏，小分子蛋白质进入孔内，因而在柱中滞留时间较长，大分子蛋白质不能进入孔内而径直流出，因此不同大小的蛋白质得以分离。
层析（chromatography）是分离、纯化蛋白质的重要方法之一。一般而言，待分离蛋白质溶液（流动相）经过一个固态物质（固定相）时，根据溶液中待分离的蛋白质颗粒大小、电荷多少及亲和力等，使待分离的蛋白质组分在两相中反复分配，并以不同速度流经固定相而达到分离蛋白质的目的。层析种类很多，有离子交换层析、凝胶过滤与亲和层析等。其中离子交换层析和凝胶过滤应用最广。例如阴离子交换层析分离蛋白质时，将阴离子交换树脂颗粒填充在层析管内，由于阴离子交换树脂颗粒带正电荷，能吸引溶液中的蛋白质阴离子（图1－26a）。然后再用含阴离子（如Cl－）的溶液洗柱，含负电荷少的蛋白质首先被洗脱下来（图1－26b）；增加Cl－浓度，含负电荷多的蛋白质也被洗脱下来（图1－26c），于是两种蛋白质被分开。
图1－26 离子交换层析分离蛋白质
（a）样品全部交换并吸附到树脂上；（b）负电荷较少的分子用较稀的Cl－或其他负离子溶液洗脱；（c）电荷多的分子随Cl－浓度增加依次洗脱；（d）洗脱图A280表示为280nm的吸光度
凝胶过滤（gel filtration）又称分子筛层析。层析柱内填满带有小孔的颗粒，一般由葡聚糖制成。蛋白质溶液加于柱的顶部，任其往下渗漏，小分子蛋白质进入孔内，因而在柱中滞留时间较长，大分子蛋白质不能进入孔内而径直流出，因此不同大小的蛋白质得以分离（图1－27）。
图1－27 凝胶过滤分离蛋白质
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