测定溶液吸光度为什么要从小到大

实验四　旋光度的测定

一、实验目的

1．了解旋光仪的测定原理。

2．学习使用旋光仪。

二、基本原理

当平面偏振光通过具有旋光性的有机物分子时，偏振光的偏振面发生偏转，凡向顺时针方向偏转的称为右旋，用+或d表示，反之为左旋，用－或l表示。所偏转的角度用α 表示。

一种旋光性物质的旋光度大小，从其内因看，是决定于液体的密度、溶液浓度和液层的厚度（管长）；从其外因看，不同的温度、波长、溶剂都影响旋光度的大小，甚至是光的方向。因此，在测定旋光度时，必须将测定时的温度，所用偏振光的波长，所用溶剂都加以注明。以符号表示，其中λ规定为D（钠光），温度定为20℃，即称为比旋光度，它对某一个具体有机物是一个常数，其数值由实验测定并通过计算得出，具体公式如下：

D——钠光光谱中的D线，波长相当于589nm；

α——实际测得的旋光度（o）；

l——装试样的管长（dm）；

C——溶液浓度[g·(100mL)^－1]。

若试样为液体时，公式表示为：

ρ——液体在20℃时的密度（g·mL⁻¹）。

旋光度测定常应用于糖类、氨基酸、萜类、生物碱等天然物的鉴定和研究中。旋光仪的种类很多，有圆盘式刻度以及自动等，最常用的为圆盘旋光仪。旋光仪基本结构如图3-5所示。

图3-5　旋光仪基本结构

三、仪器和试剂

1．仪器

圆盘旋光仪

2．试剂

已知糖溶液　　　　未知糖溶液

四、实验步骤

1．样品管装样

打开样品管一端的螺丝帽盖，将样品管直立，装填已配好的糖液，使之液面凸出管口。将玻璃盖沿管口边缘轻轻平推盖好，管内不能带有气泡，盖上螺丝帽盖，旋紧，使之不漏。但不要过紧，以免使玻璃盖产生扭力，使管内有空隙，影响旋光。最后将样品管外的液体擦干。

2．旋光仪零点的校正和读数

接通电源，开启钠光灯，约5分钟后，待钠光灯发光正常后将盛有蒸馏水的一样品管放在旋光仪内，关上盖子，将刻度盘调节在零的附近。旋转粗动、微动手轮，使视场内I和Ⅱ部分的亮度一致，如图3-6所示。记下左右读数。重复操作。取其平均值，即为旋光仪的零点。

图3-6　旋光仪三分视场的观察

该仪器的读数部分采用了光学游标跳线对准的装置。整个度盘分成720格，每格读数值为0.5度，游标分25格，每格读数值为0.02，正确的读数是：找出度盘与游标之间的连线，确定度盘的读数和游标的读数。度盘的读数为游标中O所对的相对读数，而度盘的读数只能精确到0.5度（每格只有0.5度），而剩余尾数的读数，需要通过游标和度盘之间的连线上游标的读数来确定。若同时有两条线相连，则应取其两线所连的读数的平均值。然后加上度盘的度数为最终读数。

3．旋光度的测定

将盛有糖液的样品管放入旋光仪内。按测定零点的方法重复操作，取其平均值。所得到数值与零点的差值即为该样品的旋光度。记录所用样品管的长度及溶液的浓度。计算比旋光度。

再按上述方法测定未知浓度的糖溶液，确定其浓度。

五、实验内容

1．已知糖溶液的浓度，测定该糖的旋光度，并计算其比旋光度。

2．未知糖溶液的浓度，通过第1项计算其比旋光度后，再根据所测得该糖的旋光度来计算出该糖溶液的浓度。

附　注

1．仪器连续使用时间不宜超过4小时，若使用的时间过长，中间应关机10～15分钟，待钠光灯冷却后再继续使用，以免降低亮度，影响寿命。

2．镜片均不得用手或一般的纸张擦拭，应用柔软绒布或擦镜纸擦拭。