可按其种类及其发育时期而分为两类,即针插法及玻片法。
1.针插法 是指采用昆虫针或三角针尖固定昆虫,然后插置于木盒或玻璃管中。这样的制作方法,称为针插法。针插法适合于制作成虫时期的大型昆虫,尤其是有翅昆虫的标本。用针插法制成的标本,既不容易损坏节肢动物体上的鳞片或刚毛,也能很好地保持昆虫的色泽,而且便于用放大镜或解剖镜从任何角度与方位进行检验。根据虫体大小不同,选择昆虫针的粗细长短。例如虻、蝇等较大昆虫,可用粗而长的针;蚊、蚋等较小的昆虫,应选用细而短的针。一般来说,针主要从昆虫的胸部插入,然后将附有昆虫的针再直接插在木盒中,或管口的软木塞上,或玻璃管内的软木片上。准备一张小纸片,其上标注标本的名称,采集场所与日期。依据附有标本的针的长短,或直接将纸片穿插于附有标本的同一针上;或另取一长针穿入标注纸片,并将该长针插入于附有该标注标本的细短针所插入的软木片或塑料片的一端。昆虫越小,选用的针就越细,但亦可将小型昆虫用黏性试剂如树胶或虫胶溶化后的胶水,或塑料、有机玻璃所溶化的黏剂等黏附于硬纸片做成的三角尖的尖端上,然后在三角尖的基部宽阔处插入一长针而插置于盒内或玻璃管内。
昆虫,尤其是双翅目昆虫,应于杀死后立即制成针插标本。如果昆虫死亡时间过长,虫体会干燥变硬,针插时极易毁坏虫体。故针插死亡变硬的昆虫前,应先将虫体软化。取一块培养皿,在皿底铺一层湿棉花,棉花上再盖一层滤纸,使之受潮,然后将干硬的昆虫置放在滤纸上,盖好皿盖。经过数小时或过夜后,虫体即可变软。回潮时间,因昆虫的大小不同而异,一般需12~48h。有些较小的双翅目昆虫虽经这样的处理后,但往往不易软化,虫体依然脆而易碎。因此对于较小的双翅目昆虫,其干硬后不宜针插,可用胶水或黏剂黏附于硬纸片做成的三角尖上以制作标本。
注意事项:插入虫体或插入软木片或硬纸片一端的昆虫针,应在距离针尖上端的约1/4长度处留下空位,便于手持。下面约3/4的长度,可穿入标注有资料的纸片。直接插入昆虫体的针,均宜采用不锈钢针,以免生锈时损坏虫体。在针插或胶粘数个同一种类的昆虫标本时,应选择各昆虫胸部不同的部位将针插入,或将三角尖的尖端在各昆虫胸部不同的部位胶粘。这样,胸部表面某一处的构造因针插被破坏或粘着被遮蔽时,可于另一标本上查见。
2.玻片法 玻片法是将昆虫封制于玻片上。玻片法适合于制作昆虫的卵、幼虫、蛹、若虫、成虫以及昆虫的部分器官标本。用玻片制成的标本,便于在显微镜下观察虫体的细微结构。玻片法具体的制片过程,因昆虫的种类、发育时期以及虫体内外部构造的性质不同而异。如果制作的是某些小型昆虫如白蛉、蚤、虱、臭虫等标本的成虫时期,或者成虫时期的外部构造如蚊的外生殖器等标本,可参考下述的操作步骤:
(1)浸泡:上述标本,如果已经过液藏,可自保存液中取出,依据保存液的性质或先移置于50%乙醇中,后再移置于蒸馏水中;或直接移置于蒸馏水中。如果未经液藏,应先在70%乙醇内浸泡半小时至数小时,然后再依次移置于50%乙醇与蒸馏水中。标本在乙醇与蒸馏水中须分别浸泡半小时至数小时。
(2)腐蚀:将标本由蒸馏水中移至5%~10%氢氧化钾或氢氧化钠等碱性液中,浸泡数小时或更长时间,时间的长短以腐蚀溶解掉虫体内部的柔软组织,使标本清晰可见而定。另外,可将盛有标本的腐蚀液放在温箱内,加快标本的腐蚀过程。
(3)清洗:从碱性液中移入蒸馏水中,浸洗半小时至数小时,并换水数次以清洗氢氧化钾或氢氧化钠液体。
(4)中和:从蒸馏水中依次移入50%乙醇中与盐酸乙醇(配制方法见试剂与溶液节)中,分别浸泡数分钟。在盐酸乙醇中主要目的是中和标本中遗留的氢氧化钾或氢氧化钠。
(5)脱水:从盐酸乙醇中依次移入70%、80%、90%、95%(或无水乙醇)中,在每个浓度中各浸泡15min或更久的时间。
(6)透明:从95%(或无水乙醇)乙醇中移入二甲苯中浸10min或更长的时间,使标本透明。
(7)制片:在玻片上加一滴加拿大树香(canada balsam),将虫体置于胶中并将各部特征展示清楚,覆以盖玻片,即完成标本的封制。如果标本过厚,可于标本周围垫衬数块玻璃碎片,再封盖玻片。
在制片过程中,应尽量避免坚硬物体与虫体的直接接触及标本的移动,以免损伤虫体或致刚毛脱落。标本从上一步骤到下一步骤,通常不移动标本,而是采用毛细吸管吸净每一步骤中浸泡标本中的试剂,然后加入下一步骤中所需的试剂。
标本制成后,贴上标签,标注采集地点和采集时间,留取空白处,待鉴定后添补该昆虫的种名。
一般而言,具有透明角质的节肢动物,标本制作后不需要染色。但如需要染色,可于上述操作过程(3)之后,将标本由蒸馏水中移入碱性复红(basic fuchsin)染液(配制方法见试剂与溶液节)中,在染液中浸染数小时使标本过度浓染,然后再按照上述操作步骤(4)~(7)依次进行。浓染后的标本移入盐酸乙醇中时,其目的主要是使过度浓染后的标本逐渐褪色,标本在盐酸乙醇中的浸染时间须依标本褪色至稍深于制作要求的程度时为止。
为使制作的标本更易观察,可在标本制作过程中加入透明剂。常用的标本透明剂有二甲苯、丁香油或冬青油(wintergreen oil)等。二甲苯的优点为透明力强而快,易与加拿大树香相合,缺点是易使标本变硬、变脆、标本收缩及变形等。丁香油和冬青油则透明较慢,且不易与加拿大树香相合,但二者可使标本柔软,移动时不易破裂。
制作昆虫的幼虫、蛹或若虫的标本,可采用加拿大树香、攸帕拉、聚乙烯醇(polyvinyl alcohol)溶液(配制方法见试剂与溶液节)或水合氯醛树胶剂等试剂封制,操作过程同以上所述。但若采用加拿大树香或攸帕拉封制标本,除粗大的幼虫如蝇蛆、臭虫的若虫以及蚊的幼虫等,须用氢氧化钾或氢氧化钠液体腐蚀外,其余均不必用碱性液处理,只须将烫死后或液藏的标本直接置入50%乙醇中,然后从操作步骤(5)开始制作,经二甲苯或丁香油或冬青油而封入于加拿大树香,或经过操作步骤(5)的过程后用攸帕拉封制。聚乙烯醇是一种合成树脂,在封制小的昆虫如虱、蚤或昆虫的部分器官如蚊的雄性外生殖器及解剖出来的器官等,可采用这种聚乙烯醇液封固。封制时,不需要将标本脱水与透明,直接将干藏或液藏后经水洗的或活的小昆虫移置于玻片上的一滴聚乙烯醇液中,覆以盖玻片,即完成标本的封制。
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