杀虫剂毒效测定技术

杀虫剂毒效测定是进行昆虫毒理研究的前提。毒效测定一般测定半数致死量（LD50）、半数致死浓度（LC50）、半数击倒量（KD50）、半数击倒时间（KT50）及半数致死时间（LT50）等来表示。常用概率分析法进行毒效分析。一般来说，毒效测定以实验室饲养的昆虫为材料，未受到外界环境的选择作用，不能完全反映对野外昆虫在现场的实际情况，但实验室饲养可以获得大量昆虫，饲养条件易标准化，昆虫生理状态较稳定、个体差异小，使测定的结果较稳定。因为昆虫存在自然死亡所以：①实验要设立对照组；②测得的死亡率要用Abbott公式校正求校正死亡率。

（一）毒效测定时的重要概念

1．半数击倒时间（KT50）　指在一定药物剂量的试验条件下，半数测试昆虫被击倒的时间，一般以min表示。

2．半数致死量（LD50）　表示在实验中使一半被实验动物（昆虫）致死所需的药剂量，一般以每千克体重毫克表示，值越大，表示该化合物的毒性越低，即越安全。急性经口毒性及经皮毒性一般均以LD50表示。

3．半数致死浓度（LC50）　表示在实验中使一半被实验动物（昆虫）致死所需的药剂浓度，一般以毫克／立方米表示，值越大，表示该化合物毒性越低，即越安全。急性吸入毒性以LC50表示。

4．校正死亡率　在不施药的对照组中，常出现少数自然死亡的个体，如果自然死亡率在5%以下，一般仅用处理组的死亡率减去自然死亡率得到校正死亡率。当自然死亡率达到5%～20%时，就不能用直接相减的方法，要使用下列公式。

5．剂量对数－概率值直线（LD－P直线）　将剂量用对数值表示，将死亡率用概率值表示，可用对数－概率值坐标纸，把杀虫剂的各浓度点在对数值坐标（横坐标）上，把校正死亡率换为概率值（由死亡率与概率值换算表中查出）点在纵坐标上，在坐标图中把各浓度／死亡概率值点出，由各点连成一条倾斜的直线，这一根直线常称LD－P直线。死亡率查概率（概率与死亡百分率换算表）。从这一直线的坡度，还可得知供试生物对该种药剂敏感性差异的程度，即坡度越大，表示供试生物个体间差异越小；坡度越小，表示差异越大。

（二）毒效测定的具体测定操作方法

1．施加杀虫剂　主要的方法有：

（1）喷雾法：将药液直接粘附在虫体上的方法，为了减少试验误差，使每一个供试昆虫尽量接受到相同的药量，要求喷雾器有一定的压力，使雾点大小一致，喷雾均匀。

（2）液浸法：将供试昆虫分别放入不同浓度的稀释药液中浸渍一下，立即取出，放在吸水纸上吸去过多的药液，移入每一组的盛器中，给予新鲜叶片作饲料，盛器上加盖纱布或纱网，饲养于室内，记录室温，观察不同时间下中毒死亡情况。

（3）药膜法：将药剂喷洒在一定面积的表面上，形成一层均匀的药膜（常用垫有滤纸的培养皿，或将叶片在药液中浸渍一下后取出或把药液加入广口瓶，将瓶转动，使药液均匀沾在瓶内壁形成药膜），然后让供试的昆虫在上面，任其与药膜接触一定时间后，再移回正常的容器中饲养，或就在接触药膜过程中，观察死亡情况。

（4）点滴法：用定量的药液微滴，滴加在供试昆虫的胸部背面，然后定时观察中毒死亡情况。此法优点是：剂量可用每克虫体接受的药量（常用微克）表示，药量容易控制，试验误差较小；缺点是费时，处理所用的溶剂、点滴的部位和液滴的大小等都可影响毒效。

以上是一些常见的经典的作用方法，另外还有一些其他方法，如：应用击倒试验法是一种可行的对浸帐灭蚊杀虫剂进行毒效测定的方法。余品（2002）击倒试验法的具体操作法是：将直径9cm的锥形生测筒用橡皮筋固定在药帐上，吸入10～12只蚊虫，用棉球堵住管口，观察记录每时间段被击倒的蚊虫数。待蚊虫接触药帐30min后，将其全部移入大口瓶内恢复饲养24h，观察复苏率和死亡率，每测定在不同部位重复6次。

2．检测数据　通常经过4、8、12或24h检测数据。实验组（大于5组不同剂量杀虫剂）每组数据包括杀虫剂的浓度（或剂量）、供试虫数和死亡虫数，对照组数据包括供试虫数和死亡虫数。观察死亡率通常按照：①一定时间内个体或其每克体重所获剂量；②群体在单位面积的接触剂量；③单位体积的浸液浓度计算死亡率。

3．分析数据

（1）计算死亡率，并用Abbott公式计算出校正死亡率。

（2）在坐标纸上描出死亡率－概率值对浓度对数或死亡率对剂量的临时LD－P直线，利用该直线及各浓度求出希望概率值，并进一步查工作概率和权重系数表求出工作概率、权重系数和权重。

（3）求出LD－P直线回归方程式，由此回归方程式求出LD50、LC50。

（4）进行χ2检验，求出LD50或LC50的95%置信限。

以上数据分析过程人工计算较为复杂，陈其津等（2001）研制了可专门用于对杀虫剂毒力测定数据进行运算和分析的计算机应用软件——杀虫剂毒力测定系统。该软件用用Delphi语言编写完成，具有较强数据库处理能力和图形处理能力，可在Windows操作系统环境下运行，具有友好的用户界面，在输入实验数据和检验概率后，能直接得到致死中浓度（LC50）、检验的结果以及95%置信限、LD－P直线方程和相应图形。