荧光分析法测定血清中的镁

Determination of Magnesiumin Serum by Fluorescence Analysis

一、实验目的

(1)了解荧光分析法的基本原理。

(2)掌握荧光分析法的基本实验技术。

(3)学习荧光分析法测定血清中镁的原理和实验方法。

(4)学会绘制标准工作曲线。

二、预习要点

(1)学习荧光分析法的基本原理。

(2)8－羟基喹啉与镁形成的配合物的激发光谱和发射光谱有何区别和联系?

(3)从分子结构角度分析8－羟基喹啉及其金属配合物的荧光性质。

三、实验基本原理

镁与8－羟基喹啉在p H=6．5的醋酸盐缓冲溶液中可反应生成具有强荧光性质的配合物，而相同条件下，8－羟基喹啉本身的荧光强度很弱，实验中可将其作为空白而扣除。在一般测定条件下，血液中的其他物质对此测无干扰。

镁和8－羟基喹啉的反应如下:

镁与8－羟基喹啉形成的配合物的荧光光谱见图3－13。

四、仪器和试剂

仪器: LS－55型荧光光度计，离心机，离心管，比色管，吸量管(1m L、5 m L)。

试剂:8－羟基喹啉乙醇溶液，20μg·m L－1镁标准溶液，未知血清样品。

图3－13 8－羟基喹啉与镁的配合物的激发光谱和发射光谱图

五、实验内容

1． 本实验采用LS－55型荧光光度计，仪器原理及使用方法见本教材2．7“常用测量仪器的使用方法”中荧光光度计部分。

2． 血清样品中镁含量的测定

(1)于3个干燥的试管中按照下述方法配制溶液:

①空白溶液: 分别加入0．1m L去离子水和3．9m L8－羟基喹啉乙醇溶液，摇匀。

②标准溶液: 分别加入0．1m LMg2+标准溶液和3．9m L8－羟基喹啉乙醇溶液，摇匀。

③未知溶液: 分别加入0．1m L未知血清样和3．9m L8－羟基喹啉乙醇溶液，充分摇匀2min，在离心机上以8000rpm的转速离心10min，取上层清液作测定用。

(2)用上述②的溶液绘制激发光谱和发射光谱。先固定发射波长为510 nm，在350～450nm范围内扫描激发光谱，确定最大激发波长λex; 再固定激发波长于λex处，在450～600nm范围内扫描发射光谱，确定最大发射波长λem。

(3)在已确定的λex和λem处分别测定(1)中a、b、c溶液的荧光强度Fa、Fb、Fc。

六、实验结果与记录

计算未知血清样品中Mg2+的含量。

式中:cx——未知血清样品中Mg2+的含量;

cs——标准溶液中Mg2+的浓度，

(本实验参考刘毅敏主编《医学化学实验》一书中实验十七“荧光分析法测定血清中的镁”)

(编者: 刘绍乾)