食品中磷元素的测定

磷(phosphorus)是构成细胞中很多重要成分的元素之一，在动物体内，磷构成骨骼和牙齿，还以复杂的有机态磷形式构成生物体的主要成分，核酸、卵磷脂、磷脂和某些辅酶等均含有磷。故测定食品中磷的含量在营养学上有重要意义。目前，食品中磷的测定方法有重量法、滴定法和钼蓝分光光度法等。

1.钼酸铵分光光度法

1)原理

食品中的有机物经酸氧化，使磷在酸性条件下与钼酸铵结合生成磷钼酸铵。此化合物经对苯二酚、亚硫酸钠还原成蓝色化合物——钼蓝。用分光光度计在波长660nm处测定钼蓝的吸光值，以定量分析磷含量。

2)试剂

①高氯酸-硝酸消化液: 1+4混合液;

②15%硫酸溶液: 取15 m L硫酸徐徐加入到80 m L水中混匀。冷却后用水稀释至100m L;

③硫酸: 相对密度1.84;

④钼酸铵溶液: 称取0.5g钼酸铵，用15%硫酸稀释至100m L;

⑤对苯二酚溶液: 称取0.5g对苯二酚于100m L水中，使其溶解，并加入一滴浓硫酸(减缓氧化作用);

⑥亚硫酸钠溶液: 称取20g亚硫酸钠于100m L水中，使其溶解。此溶液最好临用时配制，否则可使钼蓝溶液发生浑浊;

⑦磷标准贮备液(100μg/m L): 精确称取在105℃下干燥的磷酸二氢钾(优级纯)0.4394 g，加水溶解并定容至1000m L，此溶液含磷100mg/L;

⑧磷标准使用液: 精确吸取1m L磷贮备液，置于100m L容量瓶中并稀释至刻度，此溶液含磷1μg/m L。

3)分析步骤

(1)样品处理

准确称取各类食物的均匀干样0.1～0.5g或湿样2～5g于100m L凯氏烧瓶中，加入3 m L硫酸，3m L高氯酸-硝酸消化液，置于电炉上，瓶中液体原为棕黑色，待溶液变成无色或微带黄色清亮液体时，即完全消化。将溶液冷却，加20m L水，冷却后转移至100m L容量瓶中。用水多次洗涤凯氏烧瓶，合并洗液并倒入容量瓶中，加水至刻度，混匀。此样液为样品测定液。

取与消化样品同量的硫酸、高氯酸-硝酸消化液，按同一方法做空白试验。

(2)标准曲线绘制

精确吸取磷标准使用液0m L，0.5m L，1.0m L，2.0m L，3.0m L，4.0m L，5.0m L，分别置于20m L具塞试管中，依次加入2m L钼酸铵溶液摇匀，静置几秒钟。加入1m L亚硫酸钠溶液，1m L对苯二酚溶液摇匀。加水至刻度，混匀。静置0.5h后，在分光光度计660nm波长处测定吸光度。以测出的吸光度对磷含量绘制标准曲线。

(3)样品测定

根据样品含磷量的高低，准确移取数毫升样品测定液按标准曲线绘制的同样步骤操作，测定样品溶液的吸光度。从标准曲线上查出试样测定液中磷的质量。

4)分析结果的表述

式中: X——样品中磷含量，mg/100g;

m1——由标准曲线查得或回归方程算得试样测定液中磷的质量，μg;

m——样品质量，g;

V1——样品消化液的总体积，m L;

V2——测定用样品消化液的体积，m L。

在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的5%。

5)说明

本方法选自国家标准GB/T5009.87—2003，钼酸铵比色法应用较多，此法简单快速，准确性好，精密度高。钼酸铵试剂的配制、还原剂的选择和配制以及磷标准的配制等要注意操作的规范性。