硫酸铜与蔗糖有颜色反应

1.原理(GB/T5009.8—2008)

试样经处理后，用高效液相色谱氨基柱(NH2柱)分离，用示差折光器检测，根据蔗糖的折光指数，与浓度成正比，外标单点法定量。

2.试剂

除非另有规定，本方法中所用试剂均为分析纯，实验用水的电导率(25℃)为0.01 m S/m。

①硫酸铜(Cu SO4·5H2O)。

②氢氧化钠(Na OH)。

③乙腈(C2H3N): 色谱纯。

④蔗糖(C12H22O12)。

⑤硫酸铜溶液(70g/L): 称取7g硫酸铜，加水溶解并定容到100m L。

⑥氢氧化钠溶液(40g/L): 称取4g氢氧化钠，加水溶解并定容至100m L。

⑦蔗糖标准溶液(10mg/m L): 准确称取蔗糖标样1g(精确至0.0001g)置于100m L容量瓶内，先加少量水溶解，再加20m L乙腈，最后用水定容到刻度。

3.仪器

高效液相色谱仪，附示差折光检测器。

4.分析步骤

①样液制备。称取2～10g试样，精确至0.001g，加30m L水溶解，移至100m L容量瓶中，加硫酸铜溶液10m L，氢氧化钠4m L，振荡，加水至刻度，静置0.5h后过滤，取3～7 m L试样液置10m L容量瓶中，用乙腈定容，通过0.45μm滤膜过滤，滤液备用。

②高效液相色谱参考条件。

色谱柱: 氨基柱(4.6mm×250mm，5μm); 柱温:25℃; 示差检测器检测池池温:40℃;流动相: 乙腈+水(75+25); 流速: 1.0m L/min; 进样量: 10μL。

③色谱图，见图8-1。

图8－1 蔗糖色谱图

5.结果计算

试样中蔗糖含量的计算式见式(8-8):

式中: X——试样中蔗糖含量，单位为克每百克(g/100g);

c——蔗糖标准溶液浓度，单位为毫克每毫升(mg/m L)

A——试样中蔗糖中峰面积;

A'——标准蔗糖溶液峰面积;

m——试样的质量，单位为克(g);

V——过滤液体积，单位为毫升(m L);

计算结果保留三位有效数字。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。