紫外分光光度法测定氯霉素

一、实验目的

（1）了解紫外分光光度法的应用。

（2）掌握分光光度分析的基本操作和数据处理方法。

二、实验原理和技术

氯霉素的分子结构在抗菌素中是较简单的一种，其结构如下：

它有4个异构体，统称为氯胺苯醇。氯霉素为白色或微带黄绿色针状、长片状结晶或结晶粉末，无臭，微苦，微溶于水，易溶于乙醇、甲醇、丙酮或丙二醇，水溶液显中性，在弱酸及中性溶液中稳定，在碱性溶液中易分解。

紫外分光光度法测定的原理是以朗伯－比尔定律为依据。当入射光波长λ与吸收池厚度l为一定时，在一定浓度范围内，溶液的吸光度A与该溶液的浓度c成正比。氯霉素的水溶液在278nm的紫外光区有最大吸收，质量分数为1％的该溶液的摩尔吸光系数ε1cm＝298dm3／（mol·cm），以蒸馏水作参比，采用标准曲线法，即可测出未知液中氯霉素的含量。

三、仪器和试剂

1．仪器

756MC型紫外分光光度计、石英比色皿、10cm3吸量管、25cm3容量瓶 （或比色管）、100cm3容量瓶。

2．试剂

氯霉素 （可用儿童药用药片，每片含氯霉素50mg）、待测氯霉素溶液样品。

四、操作步骤

1．氯霉素标准溶液的配制

称取10mg标准氯霉素，用1cm3乙醇溶解后转移至100cm3容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。吸取此溶液2．50cm3、5．00cm3、7．50cm3、10．00cm3和12．50cm3，分别置于25cm3容量瓶 （或比色管）中，用水稀释至刻度。此系列为不同浓度的氯霉素溶液标准系列。

2．绘制吸收曲线

取中间浓度的氯霉素标准溶液 （即加入7．50cm3氯霉素的容量瓶中的溶液），在260～290nm之间，以蒸馏水作参比，作波长为1nm的吸光度扫描，扫描速度为100点／min。根据扫描出的图谱 （即吸收曲线）确定最大吸收波长λmax。

3．绘制标准曲线

以水为空白，λmax为测定波长，按数据打印方式测定标准系列的吸光度A。以吸光度A为纵坐标、浓度c为横坐标绘制标准曲线。

4．样品的测定

在同样条件下，测定待测氯霉素样品的吸光度，从标准曲线上查得其含量。

五、数据处理

以实验数据吸光度A为纵坐标、浓度c为横坐标绘制标准曲线，从标准曲线上查得待测氯霉素样品的含量。

六、思考题

（1）试比较756MC紫外分光光度计和7220型分光光度计在使用上的不同。

（2）本实验测定时能否用玻璃比色皿？为什么？