酶蛋白的质量分析

酶浓度严格来说是指酶分子的质量浓度,常以酶蛋白浓度来表示。人体体液中的酶有几百种,除LPS、LCAT、Ch E、铜氧化酶(CER)外,大多数酶的含量在μg/L水平甚至更低。因此,酶活性的测定是目前主要测定方法。20世纪70年代以后,随着新技术特别是免疫学技术的发展,酶的定量分析技术出现了许多利用酶蛋白的抗原性,通过抗原-抗体反应直接测定酶蛋白质量的新方法。国内外曾使用电泳法、柱色谱法、免疫化学法等测定酶浓度,其中以免疫化学法应用较广。免疫化学法利用酶蛋白的抗原性,制备特异性抗体,用免疫学方法测定酶的浓度。用于酶浓度测定的免疫化学方法有免疫抑制法、免疫沉淀法、放射免疫测定(RIA)和化学发光免疫测定等。

与传统的酶活性测定法相比,免疫化学测定法有一些主要优点:①灵敏度高。达到ng/L至μg/L水平,能测定样品中用原有其他方法不易测出的少量或痕量酶;②特异性高。几乎不受体液中其他物质,如酶抑制剂、激活剂等的影响,不受药物的干扰;③用于一些不表现酶活性酶蛋白的测定,如各种酶原或去辅基酶蛋白,或因遗传变异而导致合成无活性的酶蛋白,以及失活的酶蛋白等;④在某些情况下,与酶活性测定相结合,计算免疫比活性,能提供更多的具有临床应用和研究价值新的资料和信息;⑤特别适用于同工酶的测定。

酶的免疫化学测定也有其局限性,主要表现在:①要制备足够量的提纯酶作为抗原和具有免疫化学性质的抗血清常常是很困难的,而且工作量很大;②测定步骤多,操作烦琐;③测定成本高。因此,必须熟练掌握免疫化学技术,掌握抗原抗体复合物形成的最佳条件,不断降低成本,才能既保证测定结果准确,又能在临床广泛推广使用。