大肠杆菌培养及测定方法

大肠杆菌培养的常用方法，如表3-4所示。

表3-4 各种培养方法比较

一、平板固体培养

（一）划线培养

【材料】

1．菌 长有细菌的平板、甘油冻存管、转化完毕的感受态细胞等。

2．物品 接种针、煤气灯或酒精灯、加入了抗生素的新LB平板。

【操作步骤】

（二）涂布培养

【材料】

1．菌液

2．物品 涂布棒、煤气灯或酒精灯、加入了抗生素的新LB平板。

【操作步骤】

二、斜面固体培养

【材料】

1．菌 长有细菌的平板、甘油冻存管、转化完毕的感受态细胞等。

2．物品 接种环、煤气灯或酒精灯、新的斜面培养基

【操作步骤】

三、半固体培养基培养

【材料】

1．菌液

2．物品 接种针、煤气灯或酒精灯、新的半固体培养基、试管架。

【操作步骤】

四、液体培养基培养

（一）小量液体培养

【材料】

1．菌 长有细菌的平板、甘油冻存管、转化完毕的感受态细胞等。

2．物品 接种针或小木棒、煤气灯或酒精灯、2ml LB液体培养基、摇床。

【操作步骤】

1．用接种针接种

（二）大量液体培养

【材料】

1．少量初始菌

2．物品 煤气灯或酒精灯、800ml LB液体培养基、摇床。

【操作步骤】

【注意事项】

1．接种环（针）使用前后都得灼烧灭菌，灭菌后须冷却片刻方可取菌接种。

2．在离酒精灯或煤气灯较近区域内进行无菌操作。因为煤气灯产生上升气流，能防止空气中飘落下来的细菌所带来的污染。使用煤气灯或酒精灯时应注意防火。

3．在开盖前或开盖后用煤气灯或酒精灯灼烧试管口、三角瓶的瓶口2～3次。

4．开盖的试管或三角瓶的瓶口不能垂直向上，而应倾斜，以防止飘落下来的杂菌污染。

5．平皿是倒置保存的，在保存过程中盖子内侧可能有凝结的水珠，使用平皿时，应尽可能去掉这些凝结在盖上的水珠，以减少污染。此外，不要混淆不同平皿的盖子。

五、生长曲线与菌数测定

菌落特征：乳白色，圆形，菌落边缘整齐，表面光滑，表面和背面颜色一致。

培养基中细菌的生长发育过程一般可分为迟缓期、对数生长期、稳定期和衰亡期（图3-6）。这是根据培养时间的不同，细菌所经历的4个系列生理状态而分的。每一个生理状态的生长有赖于前一个生理状态的发育史。

图3-6 细菌的生长曲线

液体培养基中细菌的菌量可采用分光光度计来测定。测定波长为600nm，分别取细菌培养液与未接菌的液体培养基，加入比色杯中，以未接菌的液体培养基调零，测定菌液的吸光度值（A600）。

结果分析：A600=0.2～1.0时，细菌在指数生长期；A600＞1.0，细菌处于平台期；A600=1.0时，细菌数约为108个/ml。