【摘要】:目前尚没有任何一种方法能够直接分析混合蛋白质样品中某种专一蛋白质,但是已经有一些方法可以间接地对样品中蛋白质的种类、含量及翻译后修饰特性进行分析,如蛋白电泳染色分析、免疫印迹分析技术及放射免疫分析技术等。
目标蛋白质的测定_分子生物学实验手
目前尚没有任何一种方法能够直接分析混合蛋白质样品中某种专一蛋白质(即目标蛋白质),但是已经有一些方法可以间接地对样品中蛋白质的种类、含量及翻译后修饰特性进行分析,如蛋白电泳染色分析、免疫印迹分析技术及放射免疫分析技术等。本章介绍两种常用的分析方法:蛋白质的十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)与免疫印迹法(Western blotting)。
SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳是胶体电泳的一种,常用于生物化学、鉴识科学、遗传学和分子生物学等领域的分析技术,此项技术是将蛋白质溶液与SDS(十二烷基磺酸钠)混合,SDS为界面活性剂会破坏蛋白质的二级结构使其变性,并包覆变性蛋白质,使其带有一致的负电荷,这样可以利用样品中蛋白质分子量大小的不同,使其在电泳胶中分离。
将电泳分离的蛋白质组分转移到固定膜,常用的固定膜有硝酸纤维素膜或聚偏二氟乙烯(polyvinylidene difluoride,PVDF)膜上,然后以特异性抗体酶标二抗为探针,通过抗体-抗原反应及相应酶的显色系统将目标蛋白质(靶抗原)显示出来,称蛋白质免疫印迹法。
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