哺乳动物双杂交技术

哺乳动物双杂交能够有效地用于检测蛋白质之间体内条件下的相互作用，检测系统相对酵母双杂交较为简便，而且还有独有的优势。酵母双杂交系统中会因为蛋白质错误折叠而影响哺乳动物蛋白质的相互作用，而哺乳动物双杂交可有效地避免这种错误折叠的发生，并且提供哺乳动物蛋白质翻译后修饰以及外源性刺激条件。在运用传统的酵母、大肠埃希菌等双杂交系统研究蛋白质相互作用遇到困难时，哺乳动物双杂交为研究者提供了方便而有效的检测方案。

哺乳动物双杂交系统与大家熟知的酵母双杂交系统的工作原理是相同的，都是根据真核细胞转录激活因子包含结合结构域和影响转录的功能结构域两部分：DNA结合结构域特异（DBD：DNA-binding domain）地结合到启动子区的顺式作用元件，激活结构域（TAD：transcriptional activation domain）募集RNA聚合酶Ⅱ后启动DNA结合位点下游的报告基因转录。自然状态下成功的起始转录需要转录因子同时具有两个结构域。当两个结构域被分开表达时，只有当激活结构域和DNA结合结构域重新结合后才能起始靶基因的转录。在双杂交系统，这种结合是需要分别与两个结构域融合表达的蛋白质有相互作用时，才能启动靶基因转录事件。在哺乳动物双杂交系统，使用的是来自酵母转录激活因子Gal4的DNA结合结构域和来自病毒的强转录激活结构域VP16，当两个分别与Gal4-DBD和VP16-TAD结构域融合表达的蛋白质之间有相互作用时，可激活启动子区含有Gal4顺式作用元件的荧光素酶报告基因（Luc）表达，通过对荧光素酶活性的检测可以来判断蛋白质间的相互作用。哺乳动物双杂交与酵母双杂交系统的区别主要在于使用的是哺乳动物转染体系和哺乳动物细胞系，能够有效避免过表达蛋白错误折叠的发生，并且提供哺乳动物蛋白质翻译后修饰以及外源性刺激条件。