药物的体外抗菌试验

课堂笔记

药物的体外抗菌试验是在体外测定微生物对药物敏感程度的试验，已广泛应用于科研、生产和临床。如抗菌药物的筛选、提取过程中的追踪、抗菌谱的测定、药物含量的测定、药物血浓度测定、指导临床用药的药敏试验等。

一、常用的体外抑菌试验★★★

体外抑菌试验是最常用的抗菌试验，方法简便，需时短，用药量少，不需要动物和特殊设备，一般是在玻璃器皿中进行。常用的方法有连续稀释法和琼脂扩散法。

（一）连续稀释法

连续稀释法可用于测定药物的最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）。

1．液体培养基连续稀释法　在一系列试管中，将液体培养基按一定的倍数稀释药物，获得药物浓度递减的系列试管，然后在每一管中加入定量的试验菌，经培养一定时间后，肉眼观察试管混浊情况，记录能抑制试验菌生长的最低浓度（即MIC）。

2．固体培养基连续稀释法　分平板法和斜面法。平板法可同时测定大批试验菌株的MIC，且不受药物颜色及混浊度的影响，适于中药制剂或评定新药的药效学（药物的体外抗菌活性测定）试验。斜面法也是固体培养基连续稀释法的一种，是将系列浓度的各药物分别混入固体琼脂培养基中制成斜面，在斜面上接种一定量的试验菌，然后观察斜面是否有菌生长，判断MIC值。

（二）琼脂扩散法

琼脂扩散法是利用药物可以在琼脂培养基中扩散，在药物有效浓度的范围内形成抑菌圈或抑菌距离，以抑菌圈直径或抑菌距离的大小来评价药物抗菌作用强弱的原理设计而成，具有各种不同的方法。

1．滤纸片法　滤纸片法是琼脂扩散法中最常用的方法。适用于新药的初筛试验（初步判断药物是否有抗菌作用）及临床的药敏试验（细菌对药物的敏感性试验，以便选择用药）。

2．打孔法　在含菌琼脂平板上打孔，孔内加入药液，经培养后可产生一定大小的抑菌圈。

3．挖沟法　先制备琼脂平板，在平板上挖沟，沟两边垂直画线接种各种试验菌，再在沟内加入药液。适用于在一个平板上试验一种药物对几种试验菌的抗菌作用。

二、杀菌试验★★

（一）最低杀菌浓度或最低致死浓度的测定

杀菌试验用以评价药物对微生物的致死活性。最低杀菌浓度指该药物能杀死细菌的最低浓度。从对微生物广义而言，也可称之为最低致死浓度（MLC）。MLC的含义也可定义为在一定条件下，使绝大多数微生物被杀死，但允许有最少量微生物存活的药物最低浓度。

（二）活菌计数法

活菌计数法是在一定浓度的定量药物内加入定量的试验菌，作用一定时间后，取样进行活菌计数，从存活的微生物数计算出药物对微生物的致死率。活菌计数的方法，一般是取试验菌与药物作用后的混合液，经稀释后取定量混入琼脂培养基，倾注成平板。培养后计数长出的菌落数或菌落形成单位（CFU），再乘以稀释倍数，即得药物作用后每毫升内存活的细胞数或CFU。

（三）苯酚系数测定法

苯酚系数是以苯酚为标准，在规定的试验条件下，作用一定时间，将待测的化学消毒剂与苯酚对伤寒沙门菌或金黄色葡萄球菌的杀菌效力相比较，所得杀菌效力的比值。苯酚系数是了解消毒剂杀菌效力的一种方法。

三、联合抗菌试验★★

在药学工作中，常需检查两种抗菌药物在联合应用时的相互作用以及抗菌药物与不同pH或不同离子溶液的相互影响。如加强药物抗菌作用的为协同；减弱药物作用的为拮抗；相互无影响的为无关；作用为二者之和的为累加。

（一）纸条试验

纸条试验即在已接种试验菌的平板表面垂直放置两条各浸有一种药液的滤纸条，培养后根据抑菌区的加强、减弱或无影响来判断它们在联合应用时的效应。

（二）梯度平板纸条试验

梯度平板纸条试验，需先制备含药的梯度平板。梯度平板的制备是先将琼脂培养基倒入平皿，平皿斜置待凝，再将平板放置水平，加入含抗菌药物的琼脂培养基。在重叠的双层平板中含有梯度浓度的抗菌药物，自高浓度（＋）至低浓度（-）依次递减，要求其抑菌浓度的位置约处于平板的一半。将试验菌悬液涂布于平板表面，取滤纸条浸透另一待检药液，按梯度平板中药物浓度递减的方向置于平板表面。

（三）棋盘格法

棋盘格法是由于在试验时，含两种不同浓度药物的试管排列呈棋盘状而得名，用以评价两种药物同时用不同浓度进行联合试验时的抗菌活性。实验时排列6排试管，每排6管，共36管使成方块（棋盘格式），A及B药各以液体培养基进行稀释，A药各稀释度按纵行定量加入各管，B药各稀释度定量按横排加入，两药同时作单独抗菌试验对照。然后加入定量菌液，经培养后观察结果。

四、体外抗菌试验的影响因素★

1．试验菌　在抗菌试验中所用试验菌一般应该用标准菌株。

2．培养基　培养基的质量须加控制。

3．抗菌药物　药物的浓度和总量直接影响抗菌试验的结果，需要精确配制。

4．对照试验　为准确判断结果，实验中应设立各种对照，与抗菌试验同时进行。

重点难点提示

1．掌握常用的体外抑菌实验。

2．熟悉杀菌实验和联合抗菌实验。

3．熟悉体外抗菌实验的影响因素。

测试及考研

简答题

哪些因素会影响体外抗菌试验的结果？

答案：

①试验菌：在抗菌试验中所用试验菌一般应该用标准菌株。试验菌应合理保藏，使用前应加以纯化及必要的生物学特征鉴定。②培养基：原料、成品的外观及性能应符合要求，并经无菌检查合格后供用。③抗菌药物：药物的浓度和总量直接影响抗菌试验的结果，需要精确配制。④对照试验：为准确判断结果，实验中应设立各种对照，与抗菌试验同时进行。

（徐慰倬）