物理消毒灭菌法是利用热力或光照等物理作用，使微生物的蛋白质及酶变性或凝固，以达到灭菌的目的。热力杀菌除了取决于热力高低外，还需有足够的水分，因为携带热力的媒介是气体，而气体是由空气和水蒸气所组成，菌体蛋白质的凝固和水的含量有密切关系。含水量高，蛋白质凝固所需要的温度低；相反，含水量少或无水，则所需要的温度高。
常用的物理消毒灭菌有干热灭菌、湿热灭菌和光照消毒3种方法。
【干热灭菌法】
（1）原理和效用：指相对湿度在20%以下的高热，使菌体蛋白凝固变性。干热消毒灭菌是由空气导热，传热的效果较慢，因此，应用干热灭菌必须提高温度和适当延长消毒时间，才能达到杀菌目的。一般繁殖体在干热80～100℃中经1h可以杀死；芽胞需160～170℃经2h方可杀死。
（2）方法
燃烧：是一种简单、迅速彻底有效的灭菌法，对物品的破坏性大，多用于耐高热、已带致病菌而又无保留价值的物件，如污染的纸张，特殊感染的敷料（破伤风、气性坏疽、铜绿假单胞菌感染等）。搪瓷类物品也可用火焰燃烧消毒，如坐浴盆，先将盆洗净擦干，倒入95%酒精少许，点燃后慢慢转动容器，使其内面全部被火焰烧到。如为培养用的试管或烧瓶，当开启及关闭棉花塞子时，须在火焰上烧灼试管（瓶）口和棉花塞子，来回旋转2～3次，避免污染。
（3）注意事项：①注意安全，远离易燃或易爆炸的物品，如氧气、乙醚、汽油等。②在用酒精燃烧的过程中，不可在火焰未熄灭时加添酒精，以免引起烧伤或火灾。③贵重器械及锐利刀剪，禁用燃烧法灭菌，以免锋刃变钝或器械被破坏。
【湿热灭菌法】
（1）原理和效用：由于空气和水蒸气的作用，导热快、穿透力强，能透入菌体，使菌体胞膜膨胀破裂，原浆流出，受热凝固变性，同时蒸气具有潜热，能迅速提高灭菌物品的温度，加强灭菌效果。因此，湿热灭菌比干热灭菌所需要的温度低、时间短。一般繁殖体在湿热56～60℃经30～60min即可死亡，在100℃湿热环境中迅速死亡，但芽胞则需1～3h方可杀灭，在121．5℃的高压蒸气中经15～30min即可死亡。
（2）方法
煮沸消毒灭菌法：是一种经济方便的灭菌法，把水煮沸至100℃，保持5～10min，即可杀死细菌繁殖体，1～3h可杀灭芽胞。如在水中加入碳酸氢钠配成1%～2%的浓度时，沸点能达105℃，既可促使细菌芽胞破坏，增强杀菌的作用，又可去污、防锈。此法一般用于不怕潮湿耐高温的物品，如搪瓷、金属、玻璃、橡胶类等。
高压蒸气灭菌法：是利用高压和高热释放的潜热进行灭菌。此法杀菌力强、功效高，不仅可杀死一般的细菌，对具有顽强抵抗力的细菌芽胞也有杀灭作用，是物理灭菌法中最有效的方法。一般压强10．29N／cm2，温度121．3℃经15～30min即可灭菌。凡属耐高温不怕潮湿的物品，如敷料、手术器械、耐高热的药品、细菌培养基等均可用此法灭菌。
（3）注意事项
煮沸消毒灭菌：①煮沸前先将物品刷洗干净，去掉油渍、脓血。②煮沸时必须使物品完全浸没在水中，有轴节的器械及带盖的容器应打开使其内面和水接触，大小相同的碗、盆等均不能重叠，必须隔开，使水能在其中间流动。水沸后开始计时，如在煮沸过程中再加入其他物品，则应在第2次水沸后计时。③玻璃类物品应从冷水或温水时放入，并用纱布包好，以免突然高热或互相撞击而破裂。橡胶类物品应用纱布包裹，待水沸后放入，消毒后及时取出，以免使橡胶变软。
高压蒸气灭菌：①无菌包不宜太大，包裹不宜过紧，以免阻碍蒸气透入包内，影响灭菌效果。另外，如果物品装得太拥挤，蒸气流动不畅，则排气时蒸气不能讯速逸出，以致凝成水珠，使敷料潮湿。②应将布类物品放在金属或搪瓷类物品之上，否则蒸气遇冷成水，可使敷料潮湿。③定期检查灭菌效果。
【光照消毒法（辐射消毒）】
（1）原理和效用：主要是利用紫外线照射，使菌体蛋白发生光解、变性，菌体内的氨基酸、核酸、酶遭到破坏死亡。同时，紫外线通过空气时，使空气中的氧气电离产生臭氧，加强了杀菌作用。光照消毒可因地区、季节、环境的影响，效果有所差异，如湿度超过50%以上，温度低于4℃，杀菌能力即减弱。因此，消毒时，必须提高温度，延长消毒时间，一般室温保持在10～25℃为宜。照射环境要干净，如果空气中含800～ 900个／cm3的尘粒，杀菌效果可降低20%～30%。此外，光照消毒对杆菌杀菌力强，对球菌较弱，霉菌、酵母菌更弱，对生长期细菌敏感度高，对芽胞菌敏感度低。
光照穿透力较弱，不能透过玻璃、固体物品、尘埃、纸张和液体等，因此消毒物品必须充分暴露在光照下。
（2）方法
日光曝晒法：由于其热、干燥和紫外线的作用，而具有一定的杀菌力。一般用于被褥、床垫、毛毯、衣服等的消毒，把物品直接放在日光下曝晒，每隔2h翻动1次，使各面均同日光接触，曝晒6h可基本达到消毒目的。
紫外线法：一般指紫外线灯消毒，是人工制造的低压汞的石英气灯，将水银装入石英玻璃管内，通电后，水银气化放出紫外线。紫外线杀菌同波长有密切关系，波长在250～265nm杀菌能力最强，一般多以253．7nm为杀菌波长的代表（是细菌对紫外线吸收最快的波长）。国产紫外线灯管有15、20、30W 3种，其波长均为253．7nm。
紫外线灯多用于空气及物体表面消毒。用于空气消毒，有效距离不超过2m，时间30～60min；用于物品消毒，有效距离25～60cm，时间20～30min。因空气中的氧电离产生臭氧，需一定的时间，因此，消毒计时应从灯亮5～7min后计起。
【生物净化（层流法）】
使空气通过孔隙＜0．2μm的高效过滤器，把微生物隔离在外，使室内空气净化。一般用于手术室或烧伤病房等。
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