化妆品中金黄色葡萄球菌的检测

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）因能产生金黄色色素而得名。它为革兰氏阳性球菌，广泛分布于自然界空气、土壤及水中，可在人体皮肤、鼻腔、咽喉等处生存，耐热性强，对于干燥和紫外光的抵抗力亦较大，为一种致病菌。它可通过多种途径侵入机体，导致各种疾病并可引起皮肤或器官的多种化脓性感染（故它又名为化脓性葡萄球菌），我国化妆品卫生标准中规定在化妆品中不得检出葡萄球菌。

（一）金黄色葡萄球菌的生化特性

金黄色葡萄球菌菌体呈圆球形，直径0.8~1.0μm，常成堆排列成葡萄状，有时可单个、成双或成短链。它为需氧或兼性厌氧类细菌，在普通营养基上即可生长繁殖。它能在高浓度的食盐（质量分数7%~9%）中生长繁殖，能耐高达15%的食盐，利用此特性可与其他菌分离鉴别。它在生长繁殖过程中，在培养基上可代谢产生金黄色脂溶性色素，但也有变异菌株产生浅黄或白色色素。它能分解多种糖类，能分解甘露醇，产酸，还可液化明胶。它的另一个特性是能产生溶血素，可使血液培养基的红细胞溶解，在菌落周围产生溶血圈。金黄色葡萄球菌还能产生血浆凝固酶，能使抗凝的兔或人体的血浆发生凝固，其试验方法有两种：玻片法和试管法。葡萄球菌所产生的血浆凝固酶有两种，一种为结合凝固酶，这是结合在细菌的细胞壁上，直接作用于血浆中的纤维蛋白，使细菌凝成块状，玻片法试验的阳性结果是由此酶形成；另一种是在菌体内产生释放到菌体外，称为游离血浆凝固酶，它能使血浆中的凝血酶原变为凝血酶类产物，试管法的阳性结果是由此酶形成的。

（二）检测步骤

（1）增菌培养 将试样液稀释，无菌操作加入SCDLP液体培养基中，置37℃培养24h进行增菌培养，也可在含7.5%的氯化钠肉汤培养基中进行增菌培养。

（2）分离培养 从上述增菌培养液中，取1~2个接种环，划线接种到Baird-Pairker培养基或血琼脂平板上，置37℃培养24~38h。观察培养基所形成的菌落，血琼脂培养基的葡萄球菌菌落颜色鲜明，菌落较大（1~2mm），有溶血反应，菌落周围产生溶血圈，检出。

（3）验证试验 对所检出的细菌需进一步验证其是否是金黄色葡萄球菌，验证方法有以下三种：

①染色镜检：取可疑金黄色葡萄球菌菌落，进行革兰染色、镜检试验。

②甘露醇发酵试验：取可疑菌落接种到甘露醇发酵培养基中，培养24h，金黄色葡萄球菌能分解甘露醇，使培养基产酸。

③血浆凝固酶试验：分别进行玻片法和试管法试验，将待检菌落与滴加在玻片上的血浆和生理盐水研磨，5min内，血浆凝成块状或颗粒状，而盐水玻片上无凝固现象，这时玻片试验为阳性；试管法试验，需经24h培养，血浆凝固时为阳性。

综合分析以上所有测试结果，被检试样液经增菌、分离培养后，观察菌落疑似金黄色葡萄球菌，证实为革兰阳性葡萄球菌，且甘露醇发酵试验及血浆凝固酶试验均为阳性，即报告检出金黄色葡萄球菌；在检验金黄色葡萄球菌时，血浆凝固酶试验为主要指标。故若疑似菌落革兰阳性，不发酵甘露醇（甘露醇发酵试验阴性），但血浆凝固酶试验阳性，这时也可断定检出金黄色葡萄球菌。对疑似菌落，其革兰阳性，若甘露醇试验阴性，且血浆凝固酶试验阴性，这时可断定为未检出金黄色葡萄球菌。