【摘要】：甘油管保藏法是实验室细菌保藏最为常用的方法之一。甘油在微生物的保藏中充当保护剂的角色，它可以减少低温冷冻过程中冰晶的形成，从而克服细胞的冷冻损伤，达到长期保持细胞存活的目的。
实验六 菌种的甘油管保藏技术
一、目的要求
掌握菌种保藏的基本原理，学习实验室最为常用的菌种保藏方法。
二、基本原理
甘油管保藏法是实验室细菌保藏最为常用的方法之一。甘油在微生物的保藏中充当保护剂的角色，它可以减少低温冷冻过程中冰晶的形成，从而克服细胞的冷冻损伤，达到长期保持细胞存活的目的。
三、器材
1.鞘氨醇单孢菌:ATCC 31461。
2.培养基:结冷胶斜面培养基。
3.溶液和试剂:30%甘油（体积比）。
4.仪器和其他用具:无菌移液器吸头，1 000mL移液器，酒精灯，冰箱，无菌1.5mL离心管，记号笔等。
四、实验步骤
1.配置30%甘油，并反复高压蒸汽灭菌3次以上，冷却备用。
2.向纯化分离的黏度较大的鞘氨醇单孢菌ATCC 31461斜面中加入2mL无菌的30%甘油。
3.用无菌吸头反复吹吸，将斜面表面的菌苔与液体混合均匀。
5.取100μL菌悬液稀释涂布平板，菌落计数。
4.用无菌吸头吸取500μL剩余的菌悬液至无菌的离心管中，盖好管盖（以上步骤均需无菌操作）。
5.写好菌株名称及保藏日期等标记。
6.放入-20℃冰箱保存。
7.检测存活率，将保存的菌株取出稀释，涂布平板记数。
五、实验报告
1.结果
（1）菌种保藏记录表
（2）存活率检测结果
【注释】
[1]目是指每平方英寸中筛孔的数目。
免责声明：以上内容源自网络，版权归原作者所有，如有侵犯您的原创版权请告知，我们将尽快删除相关内容。
