【摘要】：在使用商品核酸提取试剂提取临床标本中的核酸模板前，应对其进行充分评价以验证其提取的有效性。此外，当靶核酸为RNA时，反转录PCR测定失败的常见原因多为标本在运送前未经充分的稳定化处理及核酸提取试剂的RNA酶的污染。对于前者，要核查测定分析前的步骤，如果发现有RNA降解的证据，实验室则应拒绝接受标本，要求重新采取标本，并对运送者给予详细的指导。
临床标本的处理对于分子诊断技术，尤其是核酸或基因检测是极为关键的一个环节。在抗原和抗体的免疫学测定中，临床标本中存在的干扰物质，如类风湿因子(RF)、补体及其他非特异因子等有可能会造成定性测定的假阳性或假阴性结果或使定量测定结果偏高或偏低。在检测前，对标本进行适当的稀释、加热或其他适当的预处理则可去掉这种干扰作用。
在核酸和(或)基因检测中，标本处理即核酸提取纯化是决定扩增检测成败的关键性步骤。在使用商品核酸提取试剂提取临床标本中的核酸模板前，应对其进行充分评价以验证其提取的有效性。通常，核酸制备质量不高是由于抑制物去除不完全所致，抑制物可能来源于标本本身(如血清或血浆中的血红素及其代谢产物、痰中酸性多糖和糖蛋白成分、降解靶核酸的核酸酶等)或核酸提取过程中残留的有机溶剂和添加剂，如乙二胺四乙酸(EDTA)、去垢剂[如十二烷基硫酸盐(SDS)]、离液剂(如异硫氰酸胍和盐酸胍)、酚、氯仿、乙醇，这些物质对其后的Taq酶扩增反应步骤具有强烈的抑制作用，从而影响靶核酸的扩增测定。当标本为痰时，则必须先进行液化处理，再提取核酸。需注意的是，液化时不能加热，液化时间不能过长。此外，当靶核酸为RNA时，反转录PCR测定失败的常见原因多为标本在运送前未经充分的稳定化处理及核酸提取试剂的RNA酶的污染。对于前者，要核查测定分析前的步骤，如果发现有RNA降解的证据，实验室则应拒绝接受标本，要求重新采取标本，并对运送者给予详细的指导。对于后者，建议使用高质量的商品核酸提取试剂。核酸提取质量的判定方法，见表12-1。
表12-1 核酸提取质量的判定方法
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