1.组织越新鲜越好 无论是取自人体的组织还是取自动物的组织,都应立即投入固定液内。离体组织不宜长时间暴露在空气中,以免发生自溶、腐败等。一般以神经、造血组织、胰腺及胃肠道黏膜的自溶速度最快。如不能及时固定可以先把组织存放于生理盐水中再送检。
2.防止发生扭曲变形 对一些柔嫩或薄的标本如神经、肌腱、肠系膜、剪开的腔性器官、囊壁等应先平摊于吸水纸上,较大的标本应先平铺固定在蜡板上再放入固定容器中,加足固定液。对含有气体而浮于液体表面的组织如肺等,可缚以重物或表面铺以纱布、或使用真空装置吸出肺内气体,使其下沉于固定剂内。总之,要使标本完全浸透在固定液中。
3.固定液用量和浓度 固定组织时,不同的固定液的浓度一定要按相应的标准配制。固定液的用量一般为所固定组织块体积的10倍以上效果最佳。固定用的容器要密闭且足够大,勿使标本贴壁或沉底,必要时将标本悬浮或垫隔纱布、滤纸等。1个容器内所放标本勿太多、勿过大,对大标本要规范切开,保证固定液的渗入。
4.固定时间 应根据标本的性质、大小等,固定液种类、性质、渗透力的强弱,温度的高低等因素而定。一般10%中性甲醛对组织的渗透速度为1mm/1~4h,故一般情况下黏膜活检小组织常需要2~8h,大标本为10~20h,个别特殊标本可长达数日。某些固定剂对组织的硬化作用较强,固定时间不宜过长,尽量把标本切取成小块以缩短固定时间。
5.固定温度 大多数可在室温(25℃)固定,在低温(4℃)固定时,固定时间应相应延长。
6.固定液pH 不同的固定液其pH要求不同,pH范围6~8。酸性环境中甲醛易形成甲醛色素,呈黑色沉积在组织中,故常用磷酸盐、碳酸盐缓冲液配成中性缓冲甲醛固定液。
7.固定后冲洗 最好是流水冲洗,除去多余的固定液及沉淀物。如Zenker液固定后应除去汞结晶。Bouin液固定后,应用50%~70%乙醇洗涤除去苦味酸。
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