呼吸系统细胞样本分为两大类:①脱落的细胞样本:痰液;②机械性脱落的细胞样本:支气管冲洗液、支气管刷取的样本及支气管肺泡灌洗液等。
(一)痰液脱落细胞
痰是呼吸道的特殊产物,包含黏液、细胞和其他非细胞成分。送达细胞室的痰样本一般为新鲜痰样本和已预处理保存的痰样本两类。
【采集方法】 一般采集晨起咳出的深部新鲜痰液,指导病人深呼吸后用力咳痰,反复4~5次,咳出肺深部的新鲜痰液,吐入痰盒内直接送检,但若留置时间较长则需用等量的70%以上的乙醇保存。痰检一般连续3~5次,以提高阳性率。
【制片处理】
(1)用竹签或镊子挑取有诊断价值的痰液置于干净的玻片上,两张玻片对压、左右对拉,直至痰液在两张玻片上均匀平铺后,立即放入95%乙醇内固定15~20min后可染色。痰液涂片尽量薄而均匀,一般制片2~4张,有疑问的病例应适当多做涂片,以提高检出率。
(2)选取有诊断价值的痰液,加入30%~50%乙醇15ml,振荡混合,充分打碎黏液,以2 000r/min离心5min,去除上清液。若黏液较多,重复上述步骤;若有组织微粒应剔除(可另予固定制作组织蜡块),重复上述步骤。最后,取1~2滴沉淀物直接涂片;或将沉淀物移入液基固定瓶中保存待机器制片。
(二)纤维支气管镜刷片及冲洗样本
经纤维支气管镜在直视下于可疑病变部位处直接刷取样本涂片,可获得较高的阳性涂片。操作要轻柔,尽快将细胞从刷头转移到玻片上,薄而均匀地涂片,立即放入95%乙醇内固定,以免干燥。较好的方法是将取样刷直接放入预先准备好的有细胞液基保存液或生理盐水的容器(试管或瓶)内,送细胞室规范处理、制片。
(三)肺泡灌洗液细胞
纤维支气管镜下用一定量的生理盐水,灌洗使支气管肺泡的细胞脱落于液体中,收集灌洗液离心,取沉淀物涂片,95%乙醇固定。如果沉淀物含有大量黏液,则加入30%乙醇15ml,振荡混合,充分打碎黏液,以2 000r/min离心5min,去除上清液,用沉淀物涂片后立即浸入95%乙醇固定。也可以将沉淀物放入液基保存液,机器制片或离心沉淀物直接涂片。
若是血性样本,需进行溶血处理。具体操作:离心后去除上清液,加入30%~50%乙醇15ml,振荡混合后再离心,再次除去上清液。若仍是血性沉淀物,则重复此操作,直到沉淀物肉眼未见血性。
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