胶原纤维染色

胶原纤维是三种纤维中分布最广泛、含量最多的一种纤维。胶原纤维染色主要用于和肌纤维及其他组织的鉴别。

（一）苦味酸－酸性品红法（Van　Gieson，VG）

【试剂配制】

1．Weigert铁苏木素液

（1）甲液：苏木素1．0g，无水乙醇100ml。

（2）乙液：30%三氯化铁液4ml，蒸馏水95ml，纯盐酸1ml。

（3）方法：甲、乙两液须分瓶盛放，甲液配制后数天即可使用，不宜配制过多，放置时间过长染色效果不佳，平时应密封保存；乙液配制后立即可用。临用前将甲、乙两液等量混合。

2．Van　Gieson液

（1）甲液：1%酸性品红水溶液。

（2）乙液：苦味酸饱和水溶液（约1．2%）。

（3）方法：甲、乙两液分瓶盛放。临用前取甲液1份、乙液9份混合后使用。

3．1%盐酸－乙醇　75%乙醇99ml，纯盐酸1ml。

【染色程序】

（1）组织块固定于10%中性甲醛液中，常规脱水、石蜡包埋和切片。

（2）切片脱蜡至水。

（3）用Weigert铁苏木素液染5～10min。

（4）流水稍洗。

（5）1%盐酸－乙醇迅速分化。

（6）流水冲洗5～10min。

（7）用Van　Gieson液染1～2min。

（8）倾去染液，直接用95%乙醇分化和脱水。

（9）无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。

【染色结果】　胶原纤维呈鲜红色，肌纤维、细胞质和红细胞呈黄色，胞核呈蓝褐色。

（二）Masson三色法

【试剂配制】

（1）Weigert铁苏木素液：参见“苦味酸－酸性品红法（Van　Gieson，VG）”。

（2）丽春红酸性品红液：丽春红0．7g，酸性品红0．3g，蒸馏水99ml，冰醋酸1ml。

（3）1%磷钼酸水溶液：磷钼酸1．0g，蒸馏水100ml。

（4）2%苯胺蓝染液：苯胺蓝2．0g，冰醋酸2ml，蒸馏水98ml。

【染色程序】

（1）组织块固定于10%中性甲醛液中：常规脱水、石蜡包埋、切片（用Bouin液固定时，流水冲洗组织块过夜，效果更好）。

（2）切片脱蜡至水（用Zenker液固定时应对其切片进行除汞处理：切片脱蜡后，以0．5%碘乙醇作用10min，水洗，以5%硫代硫酸钠作用5min，流水冲洗10min）。

（3）Weigert铁苏木素液染5～10min。

（4）流水冲洗。

（5）1%盐酸－乙醇分化。

（6）流水冲洗5～10min。

（7）丽春红酸性品红液染5～10min。

（8）蒸馏水稍洗。

（9）1%磷钼酸水溶液处理约5min。

（10）不用水洗，直接用苯胺蓝液复染5min。

（11）0．2%冰醋酸处理1min。

（12）95%乙醇脱水并洗去冰醋酸。

（13）无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。

【染色结果】　胶原纤维呈蓝色，细胞质、肌纤维和红细胞呈红色，胞核呈蓝褐色。