【摘要】：3．Z扫描和三维重建 Z扫描是在标本的不同平面采集一系列图像。常从Z扫描图像系列中选择2～3幅图像进行数字化叠加显示特异结构。Z扫描图像可进一步处理成3D图像，这是研究3D结构和组织功能之间关系的方法之一。需要注意的是为了反映标本的实际厚度，在进行Z扫描时应选择正确的步距采集图像。
1．单张光学切片 光学切片是共聚焦显微镜的基本图像单位。标本经固定后，采用不同荧光探针进行标记，选择适当的激发光进行观察，以数字图像的形式进行储存。采集单幅光学切片约需1s。
2．延时成像和活细胞成像 延时成像和活细胞成像是LSCM的特有功能。借助CCD系统，使用预先设定的时间间隔，采集一幅光学切片图像，从而可以动态观察检测对象的变化。对于活细胞成像，细胞需放置在LSCM配备的小型CO2培养箱内，在操作时应注意使用最小强度的激光，尽量避免激光束造成的光损伤，必要时可在培养液中适当添加一些抗氧化剂（如维生素C），而对于一些荧光标记实验，需评价光暴露对标本的影响，成像后应进一步评估细胞活性。
3．Z扫描和三维重建 Z扫描是在标本的不同平面采集一系列图像。Z扫描是通过计算机控制的步进马达以预先设定的步距移动显微镜的镜台完成的，移动1个步距，采集一幅图像并进行储存，直到所有需要采集的图像都采集完成。常从Z扫描图像系列中选择2～3幅图像进行数字化叠加显示特异结构。Z扫描图像可进一步处理成3D图像，这是研究3D结构和组织功能之间关系的方法之一。需要注意的是为了反映标本的实际厚度，在进行Z扫描时应选择正确的步距采集图像。
4．四维图像 当进行活细胞成像时，用LSCM采集的Z扫描延时图像，可产生4D图像［3个空间量纲（X、Y、Z）和1个时间量纲］，借助4D观看程序，以电影形式放映。
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