一、药材干品农药残留量的检测
（一）有机氯类农药残留量的测定（气相色谱法）
1．色谱条件与系统适用性试验 弹性石英毛细管柱（30m×0．32mm×0．25μm）SE－54（或DB1701），63 Ni－ECD电子捕获检测器。进样口温度230℃，检测器温度300℃，不分流进样。程序升温：初始100℃，每分钟10℃升至220℃，每分钟8℃升至250℃，保持10min。理论板数按α－BHC峰计算应不低于1×106，两个相邻色谱峰的分离度应大于1．5。
2．对照品储备液的制备 精密称取六六六（BHC）（α－BHC，β－BHC，γ－BHC，δ－BHC）、滴滴涕（DDT）（p，p′－DDE，p，p′－DDD，o，p′－DDT，p，p′－DDT）及五氯硝基苯（PCNB）农药对照品适量，用石油醚（60～90℃）分别制成每1ml含4～5μg的溶液，即得。
3．混合对照品储备液的制备 精密量取上述各对照品储备液0．5ml，置10ml量瓶中，用石油醚（60～90℃）稀释至刻度，摇匀，即得。
4．混合对照品溶液的制备 精密量取上述混合对照品储备液，用石油醚（60～90℃）制成每1L分别含0μg、1μg、5μg、10μg、50μg、100μg、250μg的溶液，即得。
5．供试品溶液的制备
（1）药材：取供试品于60℃干燥4h，粉碎成细粉，取约2g，精密称定，置l00ml具塞锥形瓶中，加水20ml浸泡过夜，精密加丙酮40ml，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用丙酮补足减失的重量，再加氯化钠约6g，精密加二氯甲烷30ml，称定重量，超声处理15min，再称定重量，用二氯甲烷补足减失的重量，静置（使分层），将有机相迅速移入装有适量无水硫酸钠的100ml具塞锥形瓶中，放置4h。精密量取35ml，于40℃水浴上减压浓缩至近干，加少量石油醚（60～90℃）如前反复操作至二氯甲烷及丙醚除净，用石油醚（60～90℃）溶解并转移至10ml具塞刻度离心管中，加石油醚（60～90℃）精密稀释至5ml，小心加入硫酸1ml，振摇1min，离心（3 000r／min）10min，精密量取上清液2ml，置具刻度的浓缩瓶中，连接旋转蒸发器，40℃下（或用氮气）将溶液浓缩至适量，精密稀释至1ml，即得。
（2）制剂：取供试品研成细粉（蜜丸切碎，液体直接量取），精密称取适量（相当于药材2g），以下按上述供试品溶液制备法制备，即得供试品溶液。
6．测定法 分别精密吸取供试品溶液和与之相对应浓度的混合对照品溶液各1μl，分别连续进样3次，取3次平均值，按外标法计算供试品中9种有机氯类农药残留量。
（二）有机磷类农药残留量的测定（气相色谱法）
1．色谱条件与系统适用性试验 弹性石英毛细管柱（30m×0．25mm×0．25μm）DB－l7MS（或HP－5），氮磷检测器（NPD）。进样口温度220℃，检测器温度300℃，不分流进样。程序升温：初始120℃，每分钟10℃升至200℃，每分钟5℃升至240℃，保持2min，每分钟20℃升至270℃，保持0．5min。理论板数按敌敌畏峰计算应不低于6000，两个相邻色谱峰的分离度应大于1．5。
2．对照品储备液的制备 精密称取对硫磷、甲基对硫磷、乐果、氧化乐果、甲胺磷、久效磷、二嗪农、碘依可酯（乙硫磷）、马拉硫磷、杀扑磷、敌敌畏、乙酰甲胺磷农药对照品适量，用乙酸乙酯分别制成每1ml约含100μg的溶液，即得。
3．混合对照品储备液的制备 精密量取上述各对照品储备液1ml，置20ml棕色量瓶中，加乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，即得。
4．混合对照品溶液的制备 精密量取上述混合对照品储备液，用乙酸乙酯制成每1ml分别含0．1μg、0．5μg、1μg、2μg、5μg的溶液，即得。
5．供试品溶液的制备 取供试品粉末（过二号筛）约5g，精密称定，加无水硫酸钠5g，加入乙酸乙酯50～l00ml，冰浴超声处理3min，放置，取上层液滤过，药渣加乙酸乙酯30～50ml，冰浴超声处理2min，放置，滤过，合并两次滤液，用少量乙酸乙酯洗涤滤纸及残渣，与上述滤液合并。取滤液于40℃以下减压浓缩至近干，用乙酸乙酯转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，精密量取1ml，置药用炭小柱［120～400目，0．25g，内径0．9cm（如Supelclean ENVI－Carb SPE Tubes，3ml药用炭小柱），用乙酸乙酯5ml预洗］上，置多功能真空样品处理器上，用正己烷－乙酸乙酯（1∶1）混合溶液5ml洗脱，收集洗脱液，置氮吹仪上浓缩至近干，精密加入乙酸乙酯1ml使溶解，即得。
6．测定法 分别精密吸取供试品溶液和与之相对应浓度的混合对照品溶液各1μl，分别连续进样3次，取3次平均值，按外标法计算供试品中12种有机磷农药残留量。
二、药材鲜品农药残留量的检测
（一）六六六和滴滴涕农药残留量的测定（气相色谱法）
1．原理 样品中六六六、滴滴涕经提取、净化后用气相色谱法测定，与标准比较定量。电子捕获检测器对于负电极强的化合物具有较高的灵敏度，利用这一特点，可分别测出微量的六六六和滴滴涕。不同异构体和代谢物可同时分别测定。
出峰顺序：α－BHC，γ－BHC，β－BHC，δ－BHC，p，p’－DDE，o，p’－DDT，p，p’－DDD，p，p’－DDT。
2．实验材料与仪器设备
（1）仪器：小型粉碎机、组织捣碎机、电动振荡器、旋转浓缩蒸发器、吹氮浓缩器、气相色谱仪，具有电子捕获检测器（ECD）。
（2）试剂：使用的试剂一般系分析纯，有机溶剂需经重蒸馏。
①丙酮。
②正己烷。
③石油醚：沸程30～60℃。
④苯。
⑤硫酸。
⑥无水硫酸钠。
⑦硫酸钠溶液（20g／L）。
⑧六六六、滴滴涕标准溶液：准确称取α－BHC，γ－BHC，β－BHC，δ－BHC，p，p’－DDE，o，p’－DDT，p，p’－DDD，p，p’－DDT各10．0mg，溶于苯，分别移入100ml容量瓶中，加苯至刻度，混匀，每毫升含农药100．0μg，作为储备液存于冰箱中。
⑨六六六、滴滴涕标准使用液：将上述标准储备液以己烷稀释至适宜浓度，一般为0．01μg／ml。
3．实验内容与方法
（1）提取：取具有代表性的药材样品，于捣碎机中捣碎，混匀。称取匀浆2．00～5．00g，置于50ml具塞三角瓶中，加10～15ml丙酮，在振荡器上振荡30min，过滤于100ml分液漏斗中，残渣用丙酮洗涤4次，每次4ml，用少许丙酮洗涤漏斗和滤纸，合并滤液30～40ml，加石油醚20ml，摇动数次，放气。振摇1min，加20ml硫酸钠溶液（20g／L），振摇1min，静置分层，弃去下层水溶液。用滤纸擦干分液漏斗颈内外的水，然后将石油醚液缓缓放出，经盛有约10g无水硫酸钠的漏斗，滤入50ml三角瓶中。再以少量石油醚分3次洗涤原分液漏斗、滤纸和漏斗，洗液并入滤液中，将石油醚浓缩，移入10ml具塞试管中，定容至5．0ml或10．0ml。
（2）净化：5．0ml提取液加0．50ml浓硫酸，盖上试管塞。振摇数次后，打开塞子放气，然后振摇0．5min，于1 600r／min离心15min，上层清液供气相色谱法分析用。
（3）测定
①气相色谱参考条件。
色谱柱：内径3～4mm、长1．2～2m的玻璃柱，内装涂以OV－17（15g／L）和QF－1（20g／L）的混合固定液的80～100目硅藻土。
Ni－电子捕获检测器：气化室温度215℃；色谱柱温度195℃；检测器温度225℃；载气（氮气）流速90ml／min。
②测量与计算：电子捕获检测器的线性范围窄，为了便于定量，选择样品进样量使之适合各组分的线性范围。根据样品中六六六、滴滴涕存在形式，相应地制备各组分的标准曲线，从而计算出样品中的含量。
六六六、滴滴涕及异构体或代谢物含量按下式计算：
式中：Xx为样品中六六六、滴滴涕及其异构体或代谢物的单一含量，mg／kg：A1为被测定用样液中六六六或滴滴涕及其异构体或代谢物的单一含量，ng；V1为样品净化液体积，ml；V2为样液进样体积，μl；m1为样品质量，g。
结果的表述：报告平行测定的算术平均值的2位有效数字。
③允许差：相对相差≤15%。
（二）五氯硝基苯农药残留量的测定（气相色谱法）
1．原理 样品经正己烷萃取，预处理小柱净化，用气相色谱电子捕获检测器测定，与标准系列比较定量。
2．实验材料与仪器设备
（1）仪器：气相色谱仪，具电子捕获检测器、组织捣碎机、离心机、高速分散器、小型粉碎机、硅镁吸附剂预处理小柱、10μl微量注射器、K－D浓缩器的梨形瓶。
（2）试剂：①正己烷：重蒸馏。②丙酮－正己烷（1＋9）。③无水硫酸钠。④40g／L氯化钠水溶液。⑤五氯硝基苯标准储备液和中间液：准确称取五氯硝基苯0．010 0g，用正己烷溶解，转入100ml容量瓶中并用正己烷定容，得到浓度为100μg／ml储备液，将储备液稀释100倍，配成浓度为1μg／ml的标准中间液。⑥五氯硝基苯标准使用液：取中间液配制成浓度分别为0．005、0．010、0．050、0．100、0．150μg／ml系列标准使用液。⑦载体：Chromosorb W AW DMCS 80～100目。⑧固定液：OV－17和QF－1。
3．实验内容与方法
（1）提取：取药材鲜品切碎后用组织捣碎机捣碎至匀浆，干性样品加一定量蒸馏水，取相当于1．0g原样品的匀浆，置于50ml离心管中，加5ml正己烷提取，在高速分散器（10 000r／min）分散4min，离心（2 000r／min）5min，将提取液移入10ml容量瓶中，向离心管中再加3ml正己烷提取，合并2次提取液，定容至10．0ml。
（2）净化：①预处理柱的净化处理：先用1ml丙酮正己烷（1＋9）分2次淋洗预处理柱，弃去淋洗液。②将提取液5ml过柱，液体收集于K－D浓缩器的梨形瓶中，用丙酮－正己烷（1＋9）1ml分3次淋洗该柱，淋洗液并入上述K－D浓缩器的梨形瓶中，吹氮气浓缩至1ml，备用。
（3）气相色谱参考条件
①气化室（进样口）温度：230℃。
②检测器温度：230℃。
③柱箱温度：190℃。
④载气（N2）流速：50ml／min。
⑤色谱柱：内径3mm，柱长1．5m玻璃柱，100目Chromosorb W AW DMCS。
（4）测定：取1μl五氯硝基苯标准使用液及样品注入气相色谱测定，样品与标准相比较，计算出样品中五氯硝基苯的含量。
（5）结果
①计算
式中：X为食品中五氯硝基苯含量，mg／kg；m1为标准曲线算得样品中五氯硝基苯质量，ng；V1为样品注入色谱体积，μl；V2为净化液浓缩体积，ml；V3为提取液总体积，ml；V4为净化液的体积，ml；m2为样品质量，g。
②本方法检出限为5×10－9 mg，标准曲线线性范围0．005～0．150μg／ml，方法回收率97．7%；蔬菜取样1．0g时最低检出浓度为0．01mg／kg；相对相差15%。
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