一、类风湿因子
类风湿因子(rheumatoid factor,RF)是指抗人或动物IgG分子Fc片段上抗原决定簇的特异抗体,由于首先发现于RA患者并在RA患者血清中滴度较高且持续时间较长,故称之为RF。常见的RF有IgM-RF、IgG-RF、IgA-RF。
血清中大部分RF或以自由形式存在,或与IgG分子结合形成可解离性不稳定免疫复合物,但相当一部分高亲和力RF,一旦合成分泌后,即与IgG分子结合形成稳定免疫复合物,或沉积于组织或被网状内皮系统清除,因而各种检测结果不能准确反映患者RF合成情况。部分RA患者,尤其幼年RA其常规检测阴性,但凝胶过滤或酸解离患者血清后,再检测可测出RF,即隐性RF(hidden RF)。RF常用检测方法包括凝集试验(乳胶凝集试验)、浊度散射比浊法、酶联免疫吸附法(ELISA)。凝集试验仅能检测IgM-RF;而浊度散射比浊法可定量检测RF,但不能分型;ELISA法可检测出IgM型-RF、IgG型-RF和IgA型-RF。
【正常值】
凝集试验:阳性血清滴度大于1∶32;浊度散射比浊法:阳性值大于20IU/ml;ELISA法:根据结合RF的标记抗体量,推算各型RF血清含量(mg/ml)。
【处理要点】
1.结合临床明确RF阳性的临床意义。
2.如果高度提示为RA,注意CRP、ESR的检测,明确RA目前的炎症程度。
3.RF作为一自身抗体如果阳性,根据临床可进一步检测其他自身抗体(如ANA等)。
二、抗核抗体
抗核抗体(antinuclear antibody ANA):是指抗细胞各种核抗原成分抗体的总称。靶抗原分布由传统的细胞核扩展到整个细胞包括细胞核、细胞质、细胞骨架等。靶抗原成分包括DNA、RNA、蛋白、蛋白核酸复合物。在临床上,ANA检测实际上是指总抗核抗体的检测,间接免疫荧光法检测。
【正常参考范围】
多数实验室ANA阳性滴度为1∶40或1∶100以上(Hep-2细胞为底物片)。即血清1∶40或1∶100倍稀释,间接免疫荧光法显示荧光着色。报告ANA阳性结果时,注意ANA滴度和荧光图型。
【处理要点】
1.ANA检测作为总抗核抗体检测如果阳性,应进一步检测抗ENA抗体、抗ds-DNA抗体等。
2.ANA作为一自身抗体如果阳性,根据临床可进一步检测其他自身抗体,如抗平滑肌抗体、抗线粒体抗体、RF等。
三、抗DNA抗体
抗DNA抗体分为抗单链DNA(single stranded DNA,ss-DNA)抗体、抗双链DNA(double stranded DNA,ds-DNA)抗体。抗ss-DNA抗体靶抗原为核糖和脱氧核糖,反应位点在嘌呤及嘧啶碱基区;抗ds-DNA:抗体靶抗原为DNA双螺旋结构,反应位点在脱氧核糖磷酸框架上。其中抗ds-DNA抗体的临床意义较大。抗ds-DNA抗体检测方法包括间接免疫荧光法(ⅡF)、放射免疫分析法(Farr法)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、斑点金免疫渗滤法、免疫印记法。临床最常用方法为ⅡF,特异性强、简易方便,ⅡF法以马疫锥虫或短膜虫为底物,这些虫体细胞核和动基体为纯ds-DNA。
【阳性参考值】
参考范围根据实验方法和所用试剂盒不同而不同。ⅡF法:抗ds-DNA抗体阳性滴度一般为>1∶20;Farr法阳性结合率大于20%;ELISA法:参考值按试剂盒说明结合正常人测定结果规定界限值;斑点金免疫渗滤法阳性结果为线和斑点均出现粉红色。
【临床意义】
1.抗ds-DNA抗体主要见于系统性红斑狼疮,是其特异性抗体,是SLE诊断标准之一,抗ds-DNA抗体诊断SLE的特异性为90%,敏感性为70%。
2.抗ds-DNA抗体也见于其他结缔组织病,如干燥综合征、混合性结缔组织病,但阳性率低于10%、抗体滴度低,一般认为是这些疾病与SLE重叠。
3.抗ds-DNA抗体与狼疮肾炎相关。
4.抗ds-DNA抗体水平也是SLE病情活动指标之一,用于判断SLE病情活动以及药物治疗效果。
5.抗ss-DNA抗体见于多种风湿性疾病,尤其是药物狼疮阳性率较高,甚至正常老年人亦可出现,临床无太大实用价值。
四、抗ENA抗体
ENA为酸性核蛋白抗原,可溶于生理盐水或磷酸缓冲液,故称为可提取性核抗原(extractable nuclear antigen,ENA)。抗ENA抗体包括抗Sm抗体、抗RNP抗体、抗SSA抗体、抗SSB抗体、抗Jo-1抗体、抗Scl-70抗体等。目前抗ENA抗体检测方法包括对流免疫电泳、免疫双扩散、免疫印迹。
【阳性参考】
对流免疫电泳法:在琼脂介质板中形成沉淀线,抗ENA抗体阳性;免疫双扩散:待测血清与标准血清形成的沉淀线融合,说明待测血清抗体与标准血清抗体相同。免疫印迹:纤维膜条上出现显色蛋白带,提示对应抗体阳性。
五、抗中性粒细胞胞浆抗体
抗中性粒细胞胞浆抗体(anti-neutrophi cytoplasmic antibody,ANCA)是一种以中性粒细胞胞浆成分为靶抗原的自身抗体。ANCA的靶抗原蛋白(蛋白酶-3、髓过氧化酶、其他)位于中性粒细胞初级颗粒(嗜天青颗粒)和次级颗粒(特异性颗粒)中。临床上常用的ANCA检测方法为ⅡF和ELISA,ⅡF法对ANCA进行总体检测与分型,准确测定ANCA对应的靶抗原,需进行ELISA检测。蛋白酶-3(Pro-3)是C-ANCA主要抗原蛋白,髓过氧化酶(MPO)为PANCA的主要抗原蛋白,ANCA靶抗原还可为中性粒细胞的其他组分,如杀菌通透性增强蛋白、弹性蛋白酶、溶菌酶、乳铁蛋白。
【正常参考范围】
ⅡF法以正常人中性粒细胞为底物,ANCA阳性血清显示3种荧光图型:胞浆型(C-ANCA)显示中性粒细胞胞浆弥漫性细颗粒荧光染色;核周型(P-ANCA)显示中性粒细胞核周围荧光染色;非典型(a-ANCA)显示胞浆和核周均呈荧光染色。ELISA法阳性参考按试剂盒说明。
六、抗磷脂抗体
抗磷脂抗体(anti-phospholipid antibody,Apa)是一组与含有磷脂结构多种抗原物质发生反应的抗体。抗磷脂抗体检测方法包括:①ELISA法检测抗心磷脂抗体(aCL);②部分凝血活酶试验检测狼疮抗凝物质;③梅毒血清学凝集试验。目前临床上主要是抗心磷脂抗体检测,ELISA检测aCL可检测出三型aCL,即IgM-aCL、IgG-aCL、IgA-aCL。
【正常参考值】
ELISA法:酶标仪检测,以492nm波长检测吸光度,以一组阴性标本的吸光度平均值除以测定标本吸光度,≥2.1为阳性。
(王吉波)
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