1.红细胞生理
(1)红细胞的生成:①红细胞是血液中数量最多的有形成分。②起源于骨髓造血干细胞。③从造血干细胞分化发育到网织红细胞在骨髓中进行,约需72h。④在骨髓或血液中,网织红细胞到成熟红细胞约需48h。⑤红细胞平均寿命约120d。⑥衰老红细胞主要在脾破坏。
(2)红细胞生理功能:通过血红蛋白实现交换和携带气体功能。
2.血红蛋白分子结构和特点
(1)结构:血红蛋白(Hb)由两对珠蛋白肽链和4个亚铁血红素构成。①珠蛋白:4条肽链。②亚铁血红素:原卟啉、铁。
(2)特点:①正常情况下,99%Hb为还原Hb(HbA),1%为高铁Hb(HbF)。②只有Fe2+状态的Hb才能与氧结合,称为氧合血红蛋白。③人体生长各期,Hb的种类与比例不同。④血红蛋白合成受红细胞生成素、雄激素调节。⑤血红蛋白相对分子质量为64 458。⑥血红蛋白降解产物为珠蛋白、血红素。
3.检测原理、方法学评价和质量控制
(1)手工显微镜法:在显微镜下计数一定体积内的红细胞数,经换算求出每升血液中红细胞数量。不需要特殊设备,但操作复杂、费时。误差可源自样本、操作、器材和固有误差。
(2)血液分析仪法:用电阻抗和(或)光散射原理。比手工法精确(如电阻抗计数法的变异系数为2%,手工法则>11%)。当白细胞数量明显增高会干扰红细胞计数结果。应严格按规程操作,并定期进行室内和室间质控。
4.参考值和临床意义
(1)参考值:成年男性(4~5.5)×1012/L;成年女性(3.5~5.0)×1012/L;新生儿(6.0~7.0)×1012/L。
(2)医学决定水平:>6.8×1012/L,应采取治疗措施;<3.5× 1012/L,可诊断贫血;<1.5×1012/L应考虑输血。
(3)临床意义。①生理性变化:年龄、性别;精神因素;剧烈体力运动和劳动;气压减低;妊娠。②各种原因的贫血:急性、慢性红细胞丢失过多;红细胞寿命缩短;造血原料不足;骨髓造血功能减退。③红细胞增多:包括原发性、继发性和相对性红细胞增多。
5.血红蛋白测定的检测原理
(1)氰化高铁血红蛋白(HiCN)法:HiCN法是目前国际推荐测定血红蛋白的方法。血液中除硫化血红蛋白(SHb)外的各种Hb均可被高铁氰化钾氧化为高铁血红蛋白,再和CN-结合生成稳定的棕红色复合物-氰化高铁血红蛋白,其在540nm处有一吸收峰,用分光光度计测定该处的吸光度,可计算出每升血液中的血红蛋白浓度。
(2)十二烷基硫酸钠血红蛋白(SDS-Hb)法:血液中的Hb均可与低浓度SDS作用,生成SDS-Hb棕红色化合物,用分光光度计测定波峰538mm处吸光度,可得到每升血液中的血红蛋白浓度。
6.血红蛋白测定的方法学评价
(1)HiCN法:操作简单、显色快、结果稳定可靠、读取吸光度后可直接定值。缺点是氰化钾(KCN)试剂有剧毒。
(2)SDS-Hb法:操作简单、呈色稳定、准确性和精确性符合要求、无公害。但不能直接用吸光度计算Hb浓度。
(3)叠氮高铁血红蛋白(HiN3)法:优点与HiCN测定法相似。最大吸收峰在542nm,试剂毒性小于氰化钾。
(4)碱羟血红蛋白(AHD 575)法:试剂简单、呈色稳定、无公害、吸收峰在575nm、可用氯化血红素作为标准品。但仪器多采用540nm左右滤光板,限制了此法使用。
(5)溴代十六烷基三甲胺(CTAB)血红蛋白法:试剂溶血性强又不破坏白细胞,适用于仪器上自动检测Hb和白细胞。缺点是测定结果的准确度和精密度不佳。
(6)沙利(Sahli)酸化血红蛋白法:简单易行,但重复性差、误差较大,基本淘汰。
(7)血细胞分析仪:操作简单、快速,同时可获得多项红细胞参数。仪器须经HiCN标准液校正后才能使用。仪器法测定精度(CV)约为1%。
7.血红蛋白测定的质量控制 异常血浆蛋白质、高脂血症、白细胞数>30×109/L、脂滴等可产生浊度,干扰Hb测定。静脉血的Hb比毛细血管血低10%~15%。稀释倍数不准、红细胞溶解不当、血浆中脂质或蛋白质量增加会导致测定值假性增高。
HiCN参考液是制备标准曲线、计算K值、校准仪器和其他测定方法的重要物质。质控物为ACD抗凝全血;进口全血质控物;醛化半固定红细胞。
8.血红蛋白测定的参考值及临床意义
(1)参考值:成年:男性120~160g/L;女性:110~150g/L。新生儿:170~200g/L。老年人(70岁以上):男性94.2~122.2g/L;女性86.5~111.8g/L。
(2)临床意义。①生理性变化:随年龄而变化;红细胞和血红蛋白量有天内波动,上午7:00达高峰。②病理性变化:血红蛋白在判断贫血程度方面优于红细胞计数。
9.氰化高铁血红蛋白测定法操作 在5ml HiCN转化液中,加血20μl,充分混合,静置5min后,倒入光径1cm比色皿,在其最大吸收峰波长540nm处,HiCN转化液或蒸馏水调零,测定吸光度(A)。根据公式直接计算A×367.7,式中A为样本吸光度,44为毫摩尔(mol)消光系数,64 458/1 000为1mol/L Hb溶液中所含Hb克数,251为稀释倍数。采用HiCN参考液(50g/L、100g/L、150g/L、200g/L),在分光光度计上,波长540nm处,测定各种参考液的吸光度,以参考液血红蛋白含量为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线,或求出换算常数然后,根据样本吸光度(A)在标准曲线查出血红蛋白浓度,或用K值计算:Hb(g/L)=K·A。
10.红细胞形态检查原理和参考值 将细胞分布均匀的血涂片进行染色(常用瑞氏染色)后,根据各种细胞的呈色特点,在显微镜下进行观察和识别。
瑞氏染色血涂片可见成熟红细胞呈双凹圆盘形,细胞大小一致,平均直径7.2μm(范围6~9.5μm),淡粉红色,中央1/3为生理性淡染区,胞质内无异常结构。
11.红细胞形态检查的临床意义
(1)大小改变。①小红细胞:直径<6μm,见于缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血和遗传性球形细胞增多症。②大红细胞:直径>10μm,见于巨幼细胞性贫血、溶血性贫血和恶性贫血等。③巨红细胞:直径>15μm,见于巨幼细胞性贫血。④红细胞大小不均:见于严重的增生性贫血(如巨幼细胞性贫血)。
(2)血红蛋白含量改变。①正常色素性:正常人、急性失血、再生障碍性贫血和白血病等。②低色素性:缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血、铁幼粒细胞性贫血、某些血红蛋白病。③高色素性:巨幼细胞性贫血。④多色性:正常人(约占1%)、骨髓造红细胞功能活跃(如溶血性或急性失血性贫血)。⑤细胞着色不一:同时出现低色素、正常色素性两种细胞,见于铁粒幼红细胞性贫血。
(3)形状改变:包括球形红细胞、椭圆形红细胞、靶形红细胞、口形红细胞、镰状红细胞、棘红细胞、裂红细胞、有核红细胞、泪滴状红细胞及红细胞形态不整。
(4)异常结构:包括嗜碱性点彩红细胞、豪焦小体(Howell-Jolly’s body、染色质小体)、卡波环和寄生虫。
12.血细胞比容测定的检测原理和方法学评价 血细胞比容(Hct或PCV)是指在一定条件下,经离心沉淀压紧的红细胞在全血样本中所占比值。
(1)手工法:有折射计法、黏度法、比密测定法、离心法和放射性核素法。①温氏法(Wintrobe法):采用中速离心,不能完全排出红细胞间残留血浆,测定结果偏高。②微量法:采用高速离心使残留血浆比温氏法少,样本用量小、操作简便、残留血浆1%~3%。抗凝剂量不准确、混匀不充分、离心速度不够会产生误差。
(2)血液分析仪法:仪器法CV为1%,手工法CV为2%,仪器法应注意红细胞增多症或血浆渗透压异常时会出现误差。注意Hct是否与RBC、MCV相关。
13.血细胞比容测定的参考值及临床意义
(1)参考值。①温氏法:男性0.40~0.54;女性0.37~0.47。②微量法:男性0.47±0.04;女性0.42±0.05。
(2)临床意义。①增高:大量呕吐、大手术后、腹泻、失血、大面积烧伤、真性红细胞增多症、继发性红细胞增多症等。②减低:各种贫血。③输液评估:是临床输血、输液治疗疗效观察的指标。④计算平均值:作为红细胞平均体积、红细胞平均血红蛋白浓度计算的基础数据。
14.红细胞平均指数的检测原理 红细胞平均指数包括红细胞平均容积(MCV)、红细胞平均血红蛋白含量(MCH)和红细胞平均血红蛋白浓度(MCHC)。
(1)手工法:通过红细胞计数、血红蛋白量和血细胞比容值计算红细胞平均指数。
②红细胞血平均血红蛋白含量:MCH=
③红细胞平均血红蛋白浓度:MCHC=
(2)血液分析仪:能直接导出MCV值,再结合直接测定的RBC和Hb,计算出MCH(=Hb/RBC)和MCHC(=MCH× MCV)。
15.红细胞平均指数的参考值 见表2-1。
表2-1 不同人群红细胞指数的参考范围
16.红细胞平均指数的临床意义 主要用于贫血形态学分类(表2-2)。
表2-2 贫血的红细胞形态学分类
17.红细胞体积分布宽度 红细胞体积分布宽度(RDW)反映样本中红细胞体积大小的异质程度,是评价红细胞体积的客观指标,常用变异系数(CV)表示。由血液分析仪的红细胞体积直方图导出。RDW比血涂片红细胞形态大小的观察更为准确。RDW受样本中红细胞碎片、红细胞凝集、双相性红细胞的影响。
18.红细胞体积分布宽度的临床意义 RDW可作为贫血形态学分类的指标、缺铁性贫血(IDA)筛选诊断和疗效观察的指标、鉴别缺铁性贫血和β-珠蛋白生成障碍性贫血。
19.网织红细胞计数的检测原理 网织红细胞(Ret)是晚幼红细胞脱核后到完全成熟红细胞间的过渡细胞,属于未完全成熟的红细胞,经活体染色(新亚甲蓝、煌焦油蓝、中性红等染料)后,呈深染的颗粒状或网状结构。凡含两个以上的深染颗粒或具有线网状结构的无核红细胞,即为网织红细胞。①普通光学显微镜法:在镜下计数1 000个红细胞中网织红细胞的百分比或分数。②网织细胞计数仪法和血液分析仪法:用荧光染料(如吖啶橙、派若宁-Y、噻唑橙)使网织红细胞内RNA着色,用流式细胞术(FCM)得到网织红细胞数。
20.网织红细胞计数的方法学评价
(1)普通光学显微镜法:试管法操作简便、重复性较好。玻片法取血量少、染色时水分易蒸发,导致结果偏低。显微镜法受主观因素影响较多,且耗时费力。
(2)网织红细胞计数仪法:将Ret分成高荧光强度网织红细胞(HFR)、中荧光强度网织红细胞(MFR)、低荧光强度网织红细胞(LFR)3类,有助于化疗、放疗、移植患者的监测。
(3)血液分析仪法:网织红细胞成熟指数(RMI)=(MFR+HFR)/LFR×100。测量细胞多、避免主观因素、方法易于标准化。
21.网织红细胞计数的质量控制
(1)显微镜法:影响因素包括操作人员对网织红细胞的认识、血涂片质量、计数红细胞的数量、计数方法等。Miller窥盘法计数网织红细胞可减少误差。
(2)仪器法:仪器法计数红细胞10 000~50 000个。出现Howell-Jolly小体、有核红细胞、巨大血小板会使假性结果增高。
22.网织红细胞计数的参考值 显微镜计数法:成年人0.008~0.02或(25~75)×109/L,新生儿0.02~0.06。仪器法:男性RMI 9.1%~32.2%,女性12.8%~33.7%。
23.网织红细胞计数的临床意义 正常情况下,骨髓中网织红细胞均值为150×1012/L,血液中为65×109/L。骨髓Ret增多,外周血减少时,提示释放障碍;骨髓和外周血Ret均增加,提示为释放增加。网织红细胞成熟类型正常时,外周血网织红细胞中Ⅲ型占20%~30%,Ⅳ型占70%~80%,若骨髓增生明显,可出现Ⅰ型和Ⅱ型Ret。
(1)判断骨髓红细胞造血情况。①增多:见于溶血性贫血、放疗和化疗后;②减少:见于再生障碍性贫血和溶血性贫血再障危象。
(2)骨髓移植效果监测:骨髓移植后第21天,Ret>15×109/L,表示无移植并发症;<15×109/L,伴中性粒细胞和血小板增高,可能为骨髓移植失败。
(3)网织红细胞生成指数(RPI):RPI是网织红细胞生成相当于正常人的倍数。Ret生存期限一般约2d,若未成熟网织红细胞提前释放入血,Ret生存期限将延长,为了纠正网织红细胞提前释放引起的偏差,用网织RPI来反映Ret生成速率。计算公式为:被测网织红细胞百分比。用RPI估计红细胞生成有效性较准确。
24.网织红细胞计数的操作方法 在2滴10g/L煌焦油蓝生理盐水溶液中加血2滴,混匀,37℃放置15~20min,制片后,在油镜下计数至少1 000个红细胞中的网织红细胞数,计算网织红细胞百分数(%)和网织红细胞绝对值(×109/L)(=红细胞数×网织红细胞百分数)。WHO推荐使用的网织红细胞活体染液为新亚甲蓝。
25.点彩红细胞计数的原理和参考值
(1)原理:点彩红细胞是尚未完全成熟的红细胞在发育过程中受到损害,其胞质中残存变性RNA,染色后出现大小、形状不同的蓝色颗粒。经碱性亚甲蓝染色后,颗粒呈蓝色颗粒;瑞氏染色后,颗粒呈蓝黑色。在油镜下计数点彩红细胞数百分率。
(2)参考值:<0.03%。
26.点彩红细胞计数的临床意义和操作方法
(1)临床意义:增高见于①中毒,如铅、汞、银、铋、硝基苯、苯胺等。②各类贫血:如溶血性贫血、巨幼细胞性贫血、恶性贫血、恶性肿瘤等。
(2)操作方法:取新鲜血1滴制片,用甲醇固定3min,以50g/L碱性亚甲蓝液染色1~2min,然后在油镜下计数1 000个红细胞中点彩红细胞数,最后计算点彩红细胞数百分率。
27.红细胞沉降率测定的原理和方法学评价
(1)原理:红细胞沉降率(ESR,血沉)指离体抗凝血静置后,红细胞在单位时间内沉降的速度。分为缗钱状红细胞形成期、快速沉降期和细胞堆积期(缓慢沉积期)。
(2)方法学评价。①手工法:有魏氏法、潘氏法等。魏氏法为ICSH推荐方法。潘氏法与魏氏法相关性好、用血量少,适于儿童。②血沉仪法:仪器测量时间短、重复性好、不受环境温度影响。③血沉率(ZSR):不受年龄、性别、贫血、试验条件的影响,但需特殊离心仪器(Zetafuge)。
28.红细胞沉降率测定的质量控制
(1)影响红细胞缗钱状形成的主要因素。①血浆蛋白质比例:小分子蛋白如清蛋白、卵磷脂等使血沉减缓,大分子蛋白如急性反应蛋白、免疫球蛋白、巨球蛋白、胆固醇、三酰甘油等使血沉加快。②红细胞数量和形状:数量增多则血沉减慢,直径越大血沉越快。③血沉管:血沉管倾斜,沉降率增加。④血样本抗凝剂:浓度增加、血液凝固。⑤温度:室温过高(>25℃)血沉加快;室温过低(<18℃)血沉减慢。
(2)操作方法和注意事项。①取109 mmol/L枸橼酸钠0.4ml,加静脉血1.6ml,混匀,用血沉管吸入混匀全血,并直立于血沉架上,1h末准确读取红细胞下沉后的血浆段高度,即红细胞沉降率。②血沉管内径应标准(2.5mm)。③血沉架应避免直接光照、移动和振动。
29.红细胞沉降率测定的参考值
(1)魏氏法。①<50岁:男性0~15mm/h,女性0~20mm/h。②≥50岁:男性0~20mm/h,女性0~30mm/h。③>85岁:男性0~30mm/h,女性0~42mm/h。④儿童:0~10mm/h。
(2)潘氏法。成年人:男性0~10mm/h,女性0~12mm/h。
30.红细胞沉降率测定的临床意义
(1)血沉增快。①生理性:女性高于男性。老年人血沉增快。②病理性:见于各种炎症、组织损伤及坏死、恶性肿瘤、高球蛋白血症、贫血、高胆固醇血症。
(2)血沉减慢:真性或相对性红细胞增多症、DIC消耗性低凝血期、继发性纤溶期、肝病、肿瘤、其他严重疾病因未产生急性反应蛋白等使血沉减慢。
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