琼脂扩散用于哪种抗原检测

1．概念 免疫电泳技术是将凝胶内的沉淀反应与蛋白质电泳相结合的一项免疫检测技术。其基本原理是将抗原抗体凝胶扩散系统置于直流电场中，在电流作用下，抗原及抗体向异相电荷的电极快速定向泳动，缩短了两者结合的时间，加快了沉淀现象的产生。根据沉淀线（环）的有无，判断样品中有无与诊断抗体（或抗原）对应的抗原（或抗体）。

2．影响因素

（1）抗原与抗体特性：抗原或抗体的泳动速度与其所带净电荷量、分子量及物理形状等有关，净电荷量越多、颗粒越小，泳动速度越快，反之则慢。

在同一电场中，单位时间内各种带电粒子的移动距离称电泳迁移率。当有多种带电荷的蛋白电泳时，由于净电荷量不同而区分成不同区带，得以区分不同的抗原抗体复合物。

（2）电场因素：①电场强度；②溶液pH值；③离子强度；④电渗现象（指在电场中水对固相介质的相对移动，不影响蛋白质的分离，但影响其原点位置）等。

3．对流免疫电泳 是将双向琼脂扩散试验与电泳相结合的定向免疫扩散技术。

在琼脂板上打两排孔，在负电极侧的各孔内加入待检抗原溶液，在正电极侧的各孔内加入诊断抗体溶液。

在电场中，缓冲液为pH 8．6，蛋白质抗原与抗体IgG均带负电荷，应都向正极泳动，与受电渗作用影响的水流方向（向负极流动）相反。但由于抗原等电点较低（pI＜4～5），在电场中带净负电荷数较多且分子量相对较小，能克服逆向水流作用保持向正极泳动；而IgG由于等电点较高（pI 6～7）带净负电荷数较少且分子量大，不能克服逆向水流作用，因而顺水流方向朝负极泳动，致使抗原和抗体在电场中相向泳动。如果抗原与IgG对应，可在相遇的最适分子比例处形成沉淀线。

对流免疫电泳敏感度比双向扩散试验高8～16倍，可测出μg／ml量的蛋白质。

4．火箭免疫电泳 是将单向扩散试验与电泳相结合的免疫扩散技术。在含有定量抗体琼脂板上，通电后，当抗原从靠近负电极的孔中向正极泳动时，若抗原能与抗体特异结合，可在凝胶中形成火箭状不溶性免疫复合物沉淀带，其峰高与抗原量成正比。

5．免疫电泳 是区带电泳和双向琼脂扩散相结合的一种免疫化学技术。

在普通琼脂板中央纵向挖一条宽2．0mm的小槽，两侧各打一孔，将待测标本与标准抗原分别加入两侧孔内，置于电场中进行区带电泳，各抗原成分因电泳迁移率不同而分离成若干不可见区带。取出琼脂板，在中央槽内加入多克隆抗体，当抗体自由扩散至槽外时，可与琼脂板中相应抗原特异结合，在抗原区带与槽之间相应位置形成不同形状和不同大小的沉淀弧线。将待测样品与标准抗原相比较，可分析待测样品中的抗原性质及成分。此技术，目前主要用在纯化抗原和抗体成分分析及正常和异常Ig的识别与鉴定，为定性试验。