1．检验目的
肌钙蛋白T是收缩蛋白中调节蛋白的部分，是急性心肌梗死较敏感的指标。检测血液中肌钙蛋白T变化对临床急性心肌梗死的诊断、观察疾病的变化及治疗效果具有重要参考价值。
2．检测原理
电化学发光免疫分析法。
EL2010 TNT是以电化学发光剂三联吡啶钌为标记物标记抗体，以三丙胺（TPA）为电子供体，在电场中因电子转移而发生特异化学发光反应，它包括电化学和化学发光两个过程。在电化学发光免疫分析系统中，磁性微粒为固相载体包被抗体（抗原），用三联吡啶钌为标记物标记抗体，在反应体系内待测标本与相应的抗体发生免疫反应，形成磁性微粒包被抗体-TNT-三联吡啶钌标记抗体复合物，这时将上述复合物吸入流动室，同时引入TPA缓冲液。当磁性微粒流经电极表面时，被安装在电极下面的电磁铁吸引住，而未结合的标记抗体和标本被缓冲液冲走。与此同时电极加压，启动电化学发光反应，使三联吡啶钌和TPA在电极表面进行电子转移，产生电化学发光。光信号由安装在流动室上方的光信号检测器检测，光的强度与TNT的浓度呈正比。
3．仪器设备性能参数
见仪器设备相关使用说明书
4．标本
4.1 单项 ：TNT。组合项 ：急性心肌梗死全定量。不抗凝静脉血3～5 ml（红头管），编号，离心（3 000～4 000 r/min）3～5 min分离出血清,待测。离心后的血清不能含有颗粒物或微量纤维蛋白。
4.2 在室温（15～30℃）下于8 h内检测，不能立即测定的标本应离心后保存于2～8℃的冰箱，于2 d内检测。长期储存应分离出血清于15～-20℃或更低温度的冰箱保存，避免反复冻融。
4.3 从冰箱里取出的样品检测前室温平衡30 min以上，冷冻样品实验前需混匀。
4.4 已完成测试的标本保持完整的识别号，置2～8℃冰箱内保存7 d。
5．设备和试剂
5.1 仪器设备 瑞士罗氏诊断产品有限公司Roche Elecsys 2010电化学发光免疫分析仪。
5.2 试剂种类
5.2.1 检测试剂组成 罗氏诊断产品有限公司 EL2010原装配套TNT试剂，通用PROCELL和CLEANCELL系统试剂。
5.2.2 试剂的准备 新开试剂盒需在包装上注明开盒日期，在瓶上注明开瓶日期，液体试剂，即开即用，无须特殊准备，上机前避免过度振摇产生泡沫影响测试。
5.2.3 试剂盒的保存与有效期 未开启试剂保存于2～8℃冰箱，请勿冷冻，在有效期内均可使用，已开启试剂保存于2～8℃冰箱稳定期为12周，已装载的试剂稳定期为8周。PROCELL和CLEANCELL系统试剂可常温保存。未用完的试剂可直接放置于仪器内保存。
6．容器和添加剂
血液标本采集的容器是不加抗凝剂的真空采血管。
7．校准步骤
7.1 校准品 罗氏诊断有限公司EL2010原装配套TNT定标液，冻干试剂，溶解即用，放置于2～8℃冰箱保存，在有效期内使用。检测前室温平衡30 min以上。
7.2 量值溯源 见EL2010使用说明书。
7.3 校准周期
7.3.1 不同批号试剂需分别定标，定标通过方可使用。新批号试剂必须在第一次上机注册的24 h内做批号定标，否则之后只能定标该试剂盒。
7.3.2 同批试剂如超过定标稳定时间，应重新定标，校准周期为4周。
7.3.3 出现质控漂移时；仪器进行全面保养后；仪器的重要零件更换后均需进行一次校准。
7.4 校准步骤 见《Roche Elecsys 2010电化学发光免疫分析仪标准操作程序》。
8．操作步骤
8.1 申请单及标本编号
整理检验申请单及血液标本，审核合格后，对检验申请单和血液标本进行编号。
编号总原则：急性心肌梗死全定量检验申请单编号每天从某一号（511）开始进行编号，对应于血液标本就应编同样的编号。编号完毕再对全部检验申请单、标本编号进行复查，确认无误后上机测试。
8.2 检验申请单的录入及申请工作单号
8.2.1 有条码的申请单录入 打开南方LIS管理系统→录入→样本排样系统，在测定仪器栏处选择“EL2010”,然后在样本号处输入样本编号（如511），在试管条码处进行样本扫描，点击存入，申请单上病人信息就录入了电脑，检查申请单上信息与电脑自动调出的信息是否一致。
8.2.2 无条码的申请单录入 打开南方LIS管理系统→资料录入，在仪器栏处选择“EL2010”，然后在样本号处输入样本编号（如511），在病人ID号处输入申请单上病人ID号，申请单上病人信息自动弹出，无ID号的则手工录入病人姓名、性别、年龄、科别等，检查申请单上信息与电脑自动调出的信息是否一致，检查完后点击“保存”或“F2”保存信息。
8.3 上机测试
8.3.1 待机状态下检查试剂、冲洗液和耗材量是否足够，废液桶和废物槽是否清空；
8.3.2 将质控品（300μl）或待测样本放置在样品架上；
8.3.3 打开“Orders”菜单，进行样本测试编辑；
8.3.4 光标移到“Sample ID”栏，输入样本编号，例如：“511，ENTER， 质控品编号低水平为691，中水平为692，高水平为693”，按“ENTER”，仪器会自动给予顺序号；
8.3.5 光标移到“disk-POS”栏，输入样本位置号，例如：“1”，按“ENTER”；
8.3.6 在触摸屏上选择测试项目TNT，当项目被选定，则此项目图标由绿色变为蓝色；
8.3.7 按“Register”键保存当前样本信息，光标继续回到“Sample ID”栏，顺序号自动累加，显示下一个样本位置号，可重复编辑样本测试程序；
8.3.8 将终止条码管放置到最后一个测试样本之后；
8.3.9 点击键盘上的“START”键，仪器开始运行；
8.3.10 如有条码样本无需进行样本测试编辑，直接将待测样本放置在样本架上，点击仪器键盘上的“START”键即可；
8.3.11 测试完成后，结果自动传入LIS系统，按《免疫组检验结果报告程序》经审核确认后发出报告；
8.3.12 将样本从样品架上取出放置在已测样本架上；
8.3.13 待机状态下清空废液桶和固体废物槽。
注意：必须先检测质控物，质控后方能检测待测样本。
8.4 检验结果确认 检验结果的确认应由授权签字人员进行。
9．质量控制措施
9.1室内质控
9.1.1 质控品
Bio-Rad质控品，液体试剂，于-20～-70℃冰箱保存，分装后在有效期内使用，避免反复冻融。
质控品从冰箱取出需在室温放置30 min以上充分混匀后再测定。
9.1.2 控制参数 TNT。
9.1.3 质控周期 24 h。
9.1.4 测定程序 每天早上将室内质控品加入样品杯内上机检测（见6检验程序步骤），仪器自动完成质控品的测定。结果自动传入LIS系统，绘制质控图。
9.1.5 质控规则 采用Levey-Jennings质控图，以Westgard多规则（13S、22S、10X）判断是否再控。
9.1.6 结果分析
9.1.6.1 如果质控结果在控，可以检测病人样品；
9.1.6.2 如果质控结果失控，应分析失控原因。 首先应考虑质控物本身的原因，重做一次质控以消除偶然误差，如果不是偶然误差就更换新的质控品再做质控，重测结果还是失控，就要考虑仪器和试剂方面的原因；
9.1.6.3 质控检测完成后，发现失控时填写失控报告，报告质量监督员，查处失控原因并做相应的处理。具体操作按《免疫组室内质控管理程序》处理。
9.2 室间质控
9.2.1 质控品 国家卫生部临检中心质控品（收到质控品后置-15～-20℃冰箱保存，在规定时间内检测），质控品从冰箱取出需在室温放置30 min以上充分混匀后再测定。
9.2.2 质控周期 5个/次，2次/年。
9.2.3 测定程序 将室间质控品当病人样品与之同时检测。
9.2.4 结果报告 在规定时间内上报结果或网上发送结果，禁止同外单位交流对比结果。
9.2.5 结果分析 每次室间质评结果回来后要认真总结经验，编写室间质评小结，有误差时必须及时分析原因，采取措施纠正，检测人员填写失控报告，上报质量主管。具体操作按《免疫组室间质评管理程序》处理。
10．干扰因素
10.1 严重溶血、脂血对测定结果有影响。
10.2 血清中颗粒物或微量纤维蛋白会影响测定。
10.3 接受高剂量生物素（>5 mg/d）治疗的病人，至少要等到最后一次摄入生物素8 h后才能采血。
11．结果计算及测量不确定度
11.1 仪器根据标准曲线自动给出每个标本测定结果，测定结果单位以ng/ml表示。
11.2 测量不确定度
测量不确定度的来源包括标本、标本采集过程、送检时间、保存条件、药物、测试系统、员工素质等因素。
12．生物参考区间
0～0.100 ng/ml。
13．患者检验结果可报告区间
0.010～25.00 ng/ml。
14．警告/危急值
血清TNT检测结果危急值为≥0.5 ng/ml。
15．实验室解释
cTn与骨骼肌中异质体具有不同的氨基酸顺序，由不同的基因所编码，具有独特的抗原性，其特异性更优于CK-MB。由于cTn分子量较小，心肌损伤后游离的cTn从心肌细胞胞质内释放入血，使血清中cTn浓度迅速增高，其升高的倍数往往会超过CK或CK-MB的变化。cTn升高时间与CK-MB相似，但其释放所持续的时间较长，因而可保持cTn较长时间的高水平状态。故cTn既有CK-MB升高时间早，又有LD1诊断时间长的优点。
16．安全性预警措施
16.1 进行检测分析的全过程，工作人员必须遵守实验室生物安全要求，戴上防护性手套。
16.2 样品的运输和离心过程中注意生物安全，防止溢出，如有污染应立即用0.2%过氧乙酸溶液或75%酒精溶液对环境和设备进行消毒和处理。
16.3 注意正确使用离心机，关盖后才能启动，停机后才能开盖。
16.4 在加样过程中，注意样品的溢出，如有污染应立即用0.2%过氧乙酸溶液或75%酒精溶液进行消毒和处理。
16.5 在上机过程中，注意仪器的安全运行。
16.6 工作人员在检测过程中要注意个人防护，如果皮肤和衣物不慎接触血液和废液，应立即用0.2%过氧乙酸溶液或75%酒精溶液进行消毒处理，再用肥皂水、清水冲洗；如果眼睛中溅入污染物，应立即用洗眼装置冲洗并采取必要的医疗措施。
16.7 与样品接触的一切器皿，仪器组件等都应视为有污染，实验结束后，应对其进行相关的消毒和处理。
16.8 上机的所有样品，废液和废弃物都应按传染物进行相关的消毒和处理。
17．变异的潜在来源
血液透析：有2%～3%的慢性肾功能不全血液透析患者有时会出现cTnT和cTnI的增高。这可能是由于血液透析患者并发心肌缺血的发病较高。然而有15%～20%的cTnT值增高的患者cTnI值正常。
18．报告时间
急性心肌梗死全定量检测结果于收到样品后1 h发送结果并电话通知临床。检验结果报告单于当日下午4点前由卫生员发回申请单所在的临床科室。门诊急诊患者的检验结果于收到样品后1 h发回门诊检验科结果发放处，如果有特殊情况需复检，可适当延长发放报告时间并向临床和患者说明情况并记录。
19．参考文献
[1] 叶应妩，王毓三，申子瑜．全国临床检验操作规程．3版．南京：东南大学出版社，2007．
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