（一）标本的固定
1.固定的目的
（1）迅速阻断组织或细胞离体后的自溶性变化，防止腐败，尽量保持组织和细胞原有的形态结构。
（2）使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶等成分转变成不溶性物质，并保持原有的结构和位置。
（3）固定剂有硬化作用，增加组织的硬度，便于制片。
（4）组织中的各种物质经固定后产生对染料的亲和力，利于染色和观察。
2.常用的固定剂 固定剂可分为单纯固定剂和混合固定剂。
（1）单纯固定剂
①甲醛（formaldehyde）：又称福尔马林（formalin），为一种无色可溶于水的气体，极易挥发且有强烈的刺激性气味，市售为37%～40%的甲醛水溶液。甲醛是一种还原剂，易被氧化成甲酸，故不能和锇酸、重铬酸钾及铬酸等氧化剂混合。
常用甲醛液浓度为4%，是40%甲醛溶液和水按1∶9比例配制而成（注意：甲醛的实际浓度是4%）。甲醛固定液渗透力强，对组织收缩小，能使组织硬化。甲醛可使蛋白质分子交联而起固定作用，但不能使白蛋白、核蛋白沉淀。甲醛固定液是脂肪、类脂和神经组织最佳固定液，也可固定线粒体、高尔基体，是糖的保护剂。甲醛液固定的组织细胞核着色良好，但固定时间较长时细胞核着色较差，含血较多的组织可形成黑色或黑褐色的色素，即福尔马林色素。
②乙醇（酒精，ethyl alcohol）：乙醇为无色液体，可与水在任何比例下混溶。它还是一种还原剂，很容易被氧化成乙醛，再变为乙酸，所以不能与铬酸、重铬酸钾、锇酸等氧化剂混合。
乙醇用于固定时的浓度以80%～95%最好。具有固定、硬化、脱水作用。乙醇能沉淀清蛋白、球蛋白和核蛋白，但核蛋白被沉淀后仍能溶于水，故经乙醇固定的组织，核的着色不良不利于染色体的固定。但对糖原、纤维蛋白和弹性蛋白有良好的固定效果。在基层医院没有甲醛固定液，有的用食用白酒固定组织，这样会造成组织像一些人为假象（图8-5-1），如果不熟悉可能造成误诊。
（2）混合固定液：在实际工作中较多使用混合固定液，其固定效果明显优于单一成分的固定剂。
①中性甲醛液（pH 7.0）。是人体组织和动物组织最常用的固定液，固定效果较好。以往配制中性甲醛液时甲醛的含量4%，现甲醛的含量多提高到6%～8%。目前广泛使用中性甲醛液固定液有利于作免疫组化染色和分子杂交技术。
②Carnoy液。冰醋酸、氯仿和无水乙醇混合其比例为1∶3∶6。此液穿透性强，常用于固定核酸和糖原。
图8-5-1 乙醇固定后组织的人为假象
A.图示乙醇固定标本，细胞体积增大，嗜伊红染色明显；B.图示乙醇固定标本，细胞胞质染色不均匀
③Zenker液。适用于一般组织固定，氯化汞能沉淀各种蛋白质，重铬酸钾能使类脂凝固，适用于嗜铬细胞瘤的固定。
（二）脱水
1.脱水的目的 标本经固定和水洗后，组织内含有大量水分，而水与透明剂如苯、二甲苯等不能混溶，所以组织在透明前必须经过脱水这一环节，用能与透明剂相混溶的脱水剂，如乙醇等，把组织内的水分置换出来。
2.常用的脱水剂和脱水方法 常用的脱水剂有乙醇、正丁醇、丙酮等，其中最常使用的是乙醇。
石蜡制片中一般使用不同浓度乙醇完成整个脱水过程。具体方法是从低浓度向高浓度过渡，依次为70%、80%、95%乙醇Ⅰ、95%乙醇Ⅱ、无水乙醇Ⅰ、无水乙醇Ⅱ，对一些柔嫩的组织应从30%～50%乙醇开始。注意脱水剂的量应为组织块的20～50倍，而组织在不同浓度乙醇中放置的时间则根据其种类和大小的不同具体掌握，一般为20～120分钟。在无水乙醇中不能停放时间过长，否则使组织收缩、变硬，不利于切片。
（三）透明
透明（clearing）是指用二甲苯等透明剂将组织中的脱水剂置换出来，以利于浸蜡和包埋，因组织块浸入透明剂后呈半透明状，故称透明。
1.透明的目的 组织块透明的目的是便于浸蜡包埋。透明剂既可与脱水剂相混溶，又能和包埋剂（石蜡）相混溶，起到桥梁作用，大多数脱水剂不能和包埋剂（石蜡）混溶，故必须通过透明剂置换出脱水剂后才能进行后续程序。
2.常用的透明剂 透明剂有苯、甲苯、二甲苯、三氯甲烷、汽油、香柏油等，其中最常用的是二甲苯，二甲苯是一种无色、透明、易挥发的液体，其透明能力极强，但易使组织收缩变形，故组织块在二甲苯液中放置时间不宜太长。多数透明剂对人体有害，使用时应注意防护。
3.常用透明方法 可将脱水后的组织块先用乙醇-二甲苯混合液处理或直接浸入透明剂中，经过2～3次的置换而达到透明的目的。透明时间的长短根据标本的种类和组织块的厚薄而定，一般活检标本透明15～30分钟。若组织不呈透明状，其原因可能与脱水不彻底、组织太厚、透明时间不够及某些组织本身性质有关。
（四）浸蜡与包埋
浸蜡（paraffin infiltrating）和包埋（embedding）是指标本经过前期处理后，再置入支持物中，使支持物透入组织内部，并将组织埋入、包裹的过程。常用的支持物有明胶、火棉胶、石蜡、树脂、碳蜡等，它们既是浸透剂又是包埋剂。其中最常用的是石蜡故有“浸蜡”之称。包埋是指将蜡液注入包埋模具中，迅速将组织块平放入蜡液内、摆正并取平，然后移至冷却台，使组织块同蜡液凝固在一起的过程。包埋模具目前多使用不同型号的制式不锈钢盒（已商品化）。
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