蛋白质组学研究技术

蛋白质组学研究的主要技术包括以下几种。

（一）样品制备

主要有流式细胞术（flow cytometry，FCM）和激光捕获显微切割技术（laser capture microdissection，LCM）等。

1.流式细胞术　利用流式细胞仪对处在快速、直线、流动状态中的单细胞或生物颗粒进行多参数、快速定量分析，同时可以对特定群体加以分选，从而制备细胞样品。

2.激光捕获显微切割　激光捕获显微切割是目前最为先进的方法，它快速方便，可从大量的研究材料中迅速捕获较多的目的组分。

（二）蛋白质分离技术

双向凝胶电泳（two-dimensional geleletrophoresis，2-DE）是最好的分离复杂蛋白质混合物的技术。一般来说可以从单个蛋白质样品中解析到2 000～3 000个蛋白质点，或可以从高通量常规凝胶中解析多达10 000种蛋白质。虽然2-DE分析是最为广泛使用的蛋白质分离技术，但其他的一些蛋白质分离方法也可以达到2-DE的分离程度，有的还可以分离2-DE无法分离的亚蛋白质组。这些方法包括离子交换、分子筛法、高效液相色谱法（highperformance liquid chromatography）、亲 和 层析色谱、毛细管（capillary isoelectric focusing，IEF）、毛细管电泳与质谱联用、柱层析、免疫沉淀、蛋白芯片以及蛋白质飞行质谱（surface-enhanced caser desorptionlionization，SELDI）等技术。

（三）蛋白质鉴定技术

分离蛋白质组的最好技术是2-DE。之后，数千个蛋白如何被鉴定。传统的蛋白鉴定方法，如免疫印迹法、内肽的化学测序、已知或未知蛋白的分析等通常耗时、耗力，不适合高流通量的筛选。所以，目前，所选用的技术是蛋白鉴定的图像分析、微量测序，对肽片段进行鉴定的氨基酸组分分析，MALDI-TOF-MS法进行蛋白鉴定，或者是对蛋白质复合物直接进行酶切，而后用LC-MS-MS和肽片段序列鉴定的方法鉴定蛋白质等。

（四）数据分析技术-生物信息学

由数据库、计算机网络和应用软件组成，以计算机为工具对生物信息进行储存、检索和分析。运用数学和信息学技术，组织和分析数据，用于蛋白质的结构预测、数据库建立及分析。目前，人类血清、尿液、脑脊液及某些肿瘤组织及正常组织的蛋白质组数据库已经逐步建立，某些肿瘤的蛋白质组信息还可与相应的基因组信息整合互补。用于疾病的研究和肿瘤诊断、治疗的靶分子的确定。