血清葡萄糖测定

【目的】　熟悉血糖测定的原理及操作方法，了解分光光度计的使用方法。

【原理】　葡萄糖氧化酶（glucose oxidase，GOD）利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。过氧化物酶（peroxidase，POD）可将过氧化氢分解为水和氧，后者使色原性氧受体4－氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量呈正比。

【材料】　动物血清、试管、吸管、恒温水浴箱、分光光度计。

【试剂】

1.0.1mol／L磷酸盐缓冲液（pH　7.0）　称取无水磷酸氢二钠8.67g及无水磷酸二氢钾5.3g溶于800ml蒸馏水中，用1mol／L氢氧化钠（或1mol／L盐酸）调pH至7.0，用蒸馏水定容至1L。

2.酶试剂　称取过氧化物酶1　200U，葡萄糖氧化酶1　200U，4-氨基安替比林10mg，叠氮钠100mg，溶于磷酸盐缓冲液80ml中，用1mol／L NaOH调pH至7.0，用磷酸盐缓冲液定容至100ml，4℃保存，可稳定3个月。

3.酚溶液　称取酚100mg溶于100ml蒸馏水中，用棕色瓶贮存。

4.酶酚混合试剂　酶试剂及酚溶液等量混合，4℃可存放1个月。

5.12mmol／L苯甲酸溶液　溶解苯甲酸1.4g于蒸馏水约800ml中，加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至l L。

6.100mmol／L葡萄糖标准贮存液　称取已干燥恒重的无水葡萄糖1.802g，溶于12mmol／L苯甲酸溶液约70ml中，以12mmol／L苯甲酸溶液定容至100ml。2h以后才可使用。

7.5mmol／L葡萄糖标准应用液　吸取葡萄糖标准贮存液5.0ml放于100ml容量瓶中，用12mmol／L苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。

【方法】

1.按表5-5操作。

表5-5　血清葡萄糖测定

2.混匀，置37℃水浴中，保温15min，在波长505nm处比色，以空白管调零，读取标准管及测定管吸光度。

【观察项目】

1.在分光光度计上读取各管吸光度值，并做好记录。

2.计算公式

【注意事项】

1.各管加好试剂后需混匀。

2.过氧化物酶的特异性远低于GOD，尿酸、维生素C、胆红素、血红蛋白、四环素等可与H2O2竞争色原受体，从而抑制呈色反应，使血糖测定值偏低。