金黄葡萄球菌原始报告表

葡萄球菌属（staphylococcus）是临床引起感染和环境污染的常见细菌，其临床表现呈多样性，耐药菌株明显增多，是医院感染防治的重点菌群。

葡萄菌属是一类革兰阳性球菌，排列成葡萄状。需氧或兼性厌氧生长，耐盐性较强。引起临床疾病的主要为金黄色葡萄球菌（staphylococcus aureus）、表皮葡萄球菌（staphylococcus epidermidis）和少量腐生葡萄球菌（staphylococcus saprophytics）。

【标本采集】

根据检查目的不同，采集不同的标本。常见的有脓汁，咽（鼻）拭子，排泄物，各种分泌物等。怀疑败血症或菌血症时可采取血液标本，脑膜炎可抽取脑脊液。为调查医院感染和环境污染，亦可从空气，各种物品和仪器上采集标本。

【检验程序】

葡萄球菌的检验程序见图31-1。

【操作步骤】

1.涂片与染色　脓汁及脑脊液的离心沉淀物，可直接涂片，进行革兰染色后镜检。葡萄球菌为革兰阳性，排列成葡萄状，无芽孢和荚膜的球菌。

图31-1　葡萄球菌的检验程序

2.分离培养

（1）直接分离培养：脓汁、脑脊液的离心沉淀物，可直接接种血琼脂平板，经35℃培养18～24h后，如有金黄色葡萄球菌生长，则可见直径1～3mm，圆形，表面光滑，金黄色、白色不透明的菌落（急性化脓病灶大多呈黄色或金黄色，慢性化脓病灶常呈黄色或黄白两色）。金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上，菌落周围有明显的溶血环（慢性化脓病灶常不明显）。表皮葡萄球菌的菌落呈圆形、隆起而不透明，直径比金黄色葡萄球菌小。在血琼脂平板上不溶血或有微小溶血环，此种菌落要注意与非溶血性金黄色葡萄球菌的鉴别。

（2）增菌后分离培养：患者静脉血、各种采样液取5～7ml，加入到50ml SCDLP培养液中，充分混匀，置37℃培养24h。自上述增菌液中取1～2接种环，划线接种在血琼脂培养液上，置37℃培养24～48h，挑取血琼脂平板上典型菌落，进行涂片染色和镜检。对镜检符合上述形态者，进行甘露醇发酵实验和血浆凝固酶试验。若无细菌生长，则继续培养，一般增菌培养7d。

3.甘露醇发酵实验　取上述步骤纯菌落接种于甘露醇培养液37℃培养24h，发酵甘露醇产酸。

4.血浆凝固酶试验

（1）玻片法：洁净玻片一端滴一滴灭菌生理盐水，另一端滴一滴血浆。用接种环挑取菌落分别与盐水和血混匀，5min内观察有无固体或颗粒状物。当血浆出现凝块，盐水均匀浑浊为阳性，两者均浑浊者为阴性。如两者均有凝块则需进一步做试管法试验。

（2）试管法：取无菌小试管3只，各吸取1∶4稀释的新鲜血浆0.5ml，放在灭菌小试管中，其中1只加入等量待检菌的24h肉汤培养物，另2只试管分别以已知血浆凝固酶阳性和阴性菌肉汤培养物作对照，混匀后放入37℃水浴，每30min观察1次，3h内出现凝块者为阳性。

【结果判断】

发酵甘露醇产酸，血浆凝固酶试验阳性，可判定为金黄色葡萄球菌。血浆凝固酶阴性为表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌。

【药敏试验】

新生霉素敏感试验可以鉴别表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌。表皮葡萄球菌对新生霉素敏感，腐生葡萄球菌对新生霉素耐药。

【菌种鉴别】

1.耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

（1）特点：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin resistant staphlococcus aureus，MRSA）是一种耐多种抗生素的金黄色葡萄球菌，而不是一个新种，是医院感染的重要病原菌之一。近年来，其出现的速度是惊人的。1975年，美国MRSA仅为2.4%，而1991年则上升到29%。我国有的医院报道其已达40%～52.6%。

（2）检测方法：可以采取琼脂稀释法和纸片法，也可采用多聚酶链反应技术（PCR），国内主要以纸片法为主。

（3）体操作步骤：①水解酪蛋白（Mueller-Hinton）琼脂中加入NaCl使其浓度达到4%；②将生长在血平板18～24h的金黄色葡萄球菌，用生理盐水制成相当于麦氏比浊管第一管的1／2浓度的菌悬液；③用无菌棉拭涂布在M-H培养液上；④将含量为1μg／片的苯唑青霉素纸片贴于M-H培养液上；⑤放置在30℃条件下培养48h，凡对苯唑青霉素耐药者即可确定为MRSA。依同法可以鉴定耐甲氧西林表皮葡萄球菌（MRSE）。

2.耐万古霉素金黄色葡萄球菌　耐万古霉素金黄色葡萄球菌（vancomycin resistant staphylococcus aureus，VRSA）鉴定方法与MRSA的鉴定方法基本相同，只是将含量为1μg／片的万古霉素纸片贴于已涂布金黄色葡萄球菌的M-H培养液上，培养方法相同。结果判定按抑菌圈大小确定是高敏、中敏和耐药。