血细胞比容的测定

【实验目的】

学习测定血细胞比容的方法。

【实验原理】

将定量的抗凝血灌注于特制的毛细玻璃管中，定时、定速离心后，有形成分和血浆分离，上层呈淡黄色的液体是血浆，中间很薄一层为灰白色，即白细胞和血小板，下层为暗红色的红细胞，彼此压紧而不改变细胞的正常形态。根据红细胞柱及全血高度，可计算出红细胞在全血中的容积比值，即为血细胞比容。

【实验对象】

人。

【实验用品】

草酸盐抗凝剂（0．8g草酸钾·H2O1．2g草酸銨·H2O甲醛1ml蒸馏水至100ml）或10g／L肝素，橡皮泥或半融化状态石蜡，75%乙醇，毛细玻璃管（内径1．8mm，长75mm）或温氏分血管，乙醇灯，水平式高速毛细管离心机（或普通离心机），天平，注射器，长针头，干棉球，刻度尺（精确到mm）。

【实验步骤】

1．微量毛细管比容法

（1）以抗凝剂湿润毛细管内壁后吹出，让壁内自然风干或于60～80℃干燥箱内干燥后待用。

（2）取血：常规消毒，穿刺指（或尾）尖，让血自动流出，用棉球擦去第一滴血，待第二滴血流出后，将毛细管的一端水平接触血滴，利用虹吸现象使血液进入毛细管的2／3（约50mm）处。

（3）离心：用乙醇灯熔封或橡皮泥、石蜡封堵其未吸血端，然后封端向外放入专用的水平式毛细管离心机

2．温氏分血管比容法

（1）取大试管和温氏分血管各一支，用抗凝剂处理后烘干备用。

（2）取血：可采取静脉取血或心脏取血，将血液沿大试管壁缓慢放入管内，用涂有凡士林的大拇指堵住试管口，缓慢颠倒试管2～3次，让血液与抗凝剂充分混匀，制成抗凝血。

（3）用带有长注针头的注射器，取抗凝血2ml将其插入分血管的底部，缓慢放入，边放边抽出注射针头，使血液精确到10cm刻度处。

（4）离心。

【观察项目】

1．微量毛细管比容法　以12　000r／min的速度离心5min，届时用刻度尺分别量出红细胞柱和全血柱高度（单位mm）。计算其比值，即得出红细胞比容。

2．温氏分血管比容法　将分血管以3　000r／min离心30min，取出分血管，读取红细胞柱的高度，再以同样的转速离心5min，再读取红细胞柱的高度，如果记录相同，该读数的1／10即为血细胞比容。

【注意事项】

1．选择抗凝剂必须考虑到不能使红细胞变形、溶解。草酸钾使红细胞皱缩，而草酸铵使红细胞膨胀，二者配合使用可互相缓解。鱼类多用肝素抗凝。

2．血液与抗凝剂混合、注血时应避免动作剧烈引起红细胞破裂。

3．用抗凝剂湿润的毛细玻璃管（或温氏分血管）内壁后要充分干燥。血液进入毛细管内的刻度读数要精确，血柱中不得有气体。

【思考题】

1．测定血细胞比容有哪些实际意义？

2．吸血入毛细管时如何防止有气泡？

（刘海云）