异基因造血干细胞移植后可能在骨髓形成供受者的混合嵌合体，在患者的其他器官也可能存在供者的微嵌合，而在实体器官移植后也有报道存在长期的微嵌合。临床可通过检测红细胞膜表面抗原、HLA分型特征、细胞遗传学标记、分子遗传学标记、同种异型免疫球蛋白的分析等，来检测供受者的嵌合水平。
1．红细胞膜抗原 只能用于供受者血型不同的造血干细胞移植中，移植后受者的血型转换为供者型是供者植入的标记。ABO血型系统是目前最常用的血型系统，也可利用其他血型系统（如MN血型）在供受者间的差异，来进行供受者识别，在移植后120～150d，通常仍可检出受者的红细胞同种抗原。因为红细胞的寿命为120d，因此其反映的供受者状态有一定的延迟，且不能定量反映供受者的嵌合比例。血液中含有1%～5%的异型红细胞通常可通过标准的红细胞凝集法检测出来，使用荧光微球体法可将该法敏感度提高至0．01%。
2．红细胞同工酶 用于供受者红细胞同工酶不同的移植。红细胞同工酶是由遗传决定，分子一级结构不同，但催化活性相同，能催化同一化学反应的一组酶。该方法正是利用红细胞同工酶的遗传多态性，以区分供者和受者源的造血。同工酶谱技术的基本原理是将电泳技术与酶显色方法结合起来，根据酶蛋白分子的大小核所带电荷的不同，通过电泳将其分离，然后利用酶的特异性催化活性，作用于底物而显色。根据各种同工酶特有的谱型判断同工酶的型别。缺点是易受输血影响。
3．HLA分型检测 仅适用于供受者HLA配型不全相合的造血干细胞移植，利用HLA不合的位点作为检测的标记，可用PCR方法检测。
4．细胞遗传学标记 适用于供受者性别不同的移植，可用骨髓中期分裂细胞遗传学分析（常用G显带法），根据性别染色体的比例作出嵌合体判断，但分裂相较少时，嵌合比例不准确。也可利用性染色体着丝粒探针用荧光原位杂交技术（FISH法）检测，一次可分析数百乃至上千个细胞，不受细胞分裂相缺乏的影响，中期或间期细胞均可用，敏感度达1%。某些白血病细胞存在特异性的染色体异常，也可给出移植排斥的提示。
5．可变串联重复序列和短串联重复序列（VNTRs和STRs）
在人类的基因组中，存在着许多可变串联重复区（VNTRs）和短串联重复序列（STRs），根据重复碱基对的数目，将DNA序列分为可变串联重复序列、短串联重复序列。可变串联重复序列和短串联重复序列高度保守，但重复的数目却高度变化，具有高度多态性及个体特异性，利用其数目的高度可变性可鉴别供受者的嵌合比例。VNTRs和STRs变化所致的DNA多态性可用人工合成的寡核苷酸探针检测，应用Southern印迹分析和凝胶杂交方法，可检出2%左右的混合嵌合体。常用PCR方法扩增DNA后分析，用PCR反应结束时的DNA含量来推测代表细胞基因组比例，扩增后产物经凝胶电泳后进行凝胶数字分析，计算患者特异性条带DNA所占的百分比可通过患者特异性条带DNA含量除以患者特异性条带和供者特异性条带的DNA之和得出，可检出DNA的最小百分比为1%～5%。缺点是需要的设备较多，技术要求较高。
6．单核苷酸多态性方法（SNP） 人类基因组中有300万以上的SNPs，至少有900万以上的SNP组合，大大增加了可比的基因位点，采用以SNP为标记物的实时PCR技术，可检测造血干细胞移植后嵌合比例的变化。快捷、灵敏度高，检出DNA的最小百分比为0．1%～0．01%。
7．同种异型免疫球蛋白 由于免疫球蛋白多肽链上的氨基酸的不同，各类和各型免疫球蛋白又表现出不同的抗原特异性。免疫球蛋白的抗原决定簇是由遗传决定的，表现出同种类型，具有遗传多态性。可用于移植后B细胞嵌合的检测，供受者如果存在免疫球蛋白遗传多态性的差异，可以用检测免疫球蛋白的分型，但受输血影响。
8．微嵌合的检测 在器官移植后部分患者可出现供者细胞的微嵌合，目前对于微嵌合体的检测方法有很多，如流式细胞技术，移植后前12个月供体白细胞在受体外周血可通过流式细胞技术检测，此后微嵌合体水平迅速下降，难以通过流式细胞技术检测。原位杂交和荧光染色法找含Y染色体的供体细胞，用于检测男性供者给女性受者。若供受体性别相同，可以应用检测第6号染色体上HLA的探针找到微嵌合体。敏感性最高的是DNA多形性检测，包括限制性片段长度多态性检测、杂交、巢式PCR，串联重复序列PCR，实时PCR和PCR FLOW，敏感度为1／104细胞。目前最常用的方法是通过PCR扩增受体外周血中供体特异性的DNA序列。最新的PCR FLOW方法是将细胞内扩增与流式细胞术各自的优越性相结合的新方法，可以检测移植术后微嵌合体的动态变化。
（刘丽辉）
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