碱性磷酸酶测定

碱性磷酸酶（ALP）是催化有机单磷酸酯水解的非特异性酶类。分布于很多组织的细胞膜上。含量以肝脏为最多，其次为肾脏、胎盘、小肠和骨骼肌，肌肉和红细胞中无活性。血清中的ALP主要来自肝脏和骨骼。生长期儿童血清内ALP大多数来自成骨母细胞和生长中的骨软骨细胞。尿中ALP并非来自血液，而是直接来自肾小管细胞。其检测方法常用速率法。

ALP可用于诊断肝胆和骨骼系统疾病，与ALT结合可鉴别诊断黄疸。在畸形性骨炎、维生素D缺乏病、软骨病、骨恶性肿瘤、转移性癌肿和甲状旁腺功能亢进时有不同程度地增高。

【测定方法】

1．速率法 以磷酸对硝基酚（4-NPP）为底物，2-氨基-2-甲基-1-丙醇（AMP）或二乙醇胺（DEA）为磷酸酰基的受体物质，增进酶促反应速率。4-NPP在碱性溶液中为无色，在ALP催化下，4-NPP分裂出磷酸基团，生成游离的对硝基苯酚（4-NP），后者在碱性溶液中转变成醌式结构，呈现较深的黄色。在波长405nm处监测吸光度的增高速率可计算出ALP的活性单位。此种方法现在应用较广泛。

2．比色法 在pH＝10的反应液中，ALP催化磷酸苯二钠水解，生成游离酚和磷酸，酚在碱性溶液中与4-氨基氨替比林结合，并经铁氰化钾氧化生成红色的醌的衍生物，根据红色深浅计算酶活力的高低。

【参考范围】

男性（37℃）：1～12岁＜500U／L

　　　　　　　12～15岁＜750U／L

　　　　　　　＞25岁4～150U／L

女性（37℃）：1～12岁＜500U／L

　　　　　　　＞15岁4～150U／L

【临床应用价值】

1．生理性增高。妊娠期间，从妊娠第4个月开始，因为有胎盘ALP的增加，血清ALP呈现生理性增高。发育中的儿童由于骨ALP的增加亦有生理性增高。

2．肝胆疾病会使ALP的活性增加。约60%的肝脏或胆管疾病的病人，ALP呈病理性升高。它与AST、ALT和GGT联合检查可鉴别诊断胆汁淤积状况。ALP在胆汁淤积性肝病时敏感性很高，在GGT活性增高的肝脏疾病中，对于区分胆汁淤积性疾病和酒精相关性肝损害来说，碱性磷酸酶的水平是一个很好的诊断标准。与GGT相关的ALP水平不升高或相对轻度升高，提示有酒精引起的肝损害。在肾梗死、肾衰竭和孕期并发症患者中，ALP的活性也可增加。

3．原发性／继发性甲状旁腺功能亢进症、骨源性骨肉瘤、侵入骨骼的霍奇金病等患者，血清中的ALP可能升高。

4．偶见血清ALP下降，可见于甲状腺功能低下、恶性贫血等，临床意义不大。先天性ALP缺乏或减少症在临床上罕见，可引起骨中矿物质严重缺乏，并易发生骨折。

【影响因素】

成骨细胞中含有丰富的ALP，儿童在生理性的骨骼发育期，ALP活力可比正常人高1～2倍。ALP具有年龄分布，应注意区分儿童期、孕期的生理性增高。

血清置室温（25℃），ALP活性显示轻度升高。例如：室温置6h，酶活性约升高1%；置1～4d，酶活性增高3%～6%。血清贮放于冰箱（4℃），酶活性亦出现缓慢的升高。冷冻血清，ALP活性降低，但当血清复温后，酶活性会慢慢恢复。检测时需注意保存温度及时间。

速率法应用血清或肝素抗凝血浆测定：抗凝剂如草酸盐、枸橼酸钠和EDTANa2能抑制ALP的活性，不能使用这类抗凝血浆做ALP活性的测定。

在大多数ALP测定方法中，释放出的磷酸酰基转移给水分子，生成磷酸，此时ALP的酶促反应属于水解反应。使用某些氨基酸缓冲液时，ALP酶促反应速率增强。常用于ALP测定的缓冲液有三种：①惰性型，如碳酸盐缓冲液和巴比妥缓冲液；②抑制型，如甘氨酸缓冲液；③激活型，如AMP（2-氨基-2-甲基-1-丙醇）、Tris、DEA（二乙醇胺）、EAE（ethylaminoethanol）和N-methyl-D-glucamine（N-甲基-D-葡胺）等缓冲液。激活型缓冲液，缓冲物质作为酶的一种底物（磷酸酰基的受体），参与磷酸酰基的移换反应，因此能增进酶促反应速率。使用最适浓度的激活型缓冲液时，所测得的ALP活性比使用惰性型缓冲液时高2～6倍。DEA的激活作用比AMP的激活作用更强。因此，使用不同缓冲液测定ALP活性时，其参考区间不同。

（邸　茜）