Gram染色是微生物实验室中最重要的也是最常用的染色方法之一。根据细菌细胞壁的厚度、组成和结构不同，细菌被染成蓝紫色或红色。革兰阳性菌具有厚的肽聚糖层和大量的磷壁酸，不受乙醇脱色的影响仍保留最初的蓝紫色，革兰阴性菌具有单一的肽聚糖层，其上结合有一种不均一的脂多糖——磷脂双分子层外膜，外膜可以被乙醇脱色，使得结晶紫-碘复合物外泄，最终复染为红色。
【测定方法】
1．标本涂片，固定，Gram染色。
2．光学显微镜检查（物镜100×，目镜10×）普通光源下观察。
菌体呈现蓝紫色为革兰染色阳性菌，菌体呈现红色为革兰染色阴性菌。
【结果判定】
1．培养物的Gram染色 临床微生物实验室根据Gram染色的特点进行细菌学鉴定。
2．临床标本直接Gram染色结果报告
（1）革兰阳性球菌特点：革兰阳性球菌成对，成链，成对排列。
（2）革兰阳性杆菌特点：方头的粗大杆菌，分枝样的杆菌，棒状样杆菌，并注意有无荚膜芽胞，或是否被中性粒细胞吞噬。
（3）革兰阴性菌特点：肾形成对，长丝状杆菌，球杆菌，粗大、细小，是否成弧状，是否成链，具有多形性的革兰阴性杆菌。并注意有无荚膜，或是否被中性粒细胞吞噬。临床医师根据病人临床情况决定是否开始针对性的抗生素治疗。
（4）真菌：如有则应报告（如找到酵母样孢子及假菌丝或真菌丝）。临床医师根据病人临床情况决定是否开始抗真菌治疗。
【临床应用价值】
1．临床医师根据革兰染色的结果和菌体形态特点，可获得早期治疗的依据。
2．在无菌标本中涂片染色检出菌体无论是革兰染色阳性菌或革兰染色阴性菌都应提示有临床意义，临床医生应第一时间获得初步报告。
3．在标本对于临床怀疑奴卡菌感染的病例，临床医生应及时与实验室联络，提示实验室技术人员注意Gram染色中检出形态可疑奴卡菌形态的菌体，并建议进行奴卡菌培养和弱抗酸染色。
4．对于结果报告革兰染色检出有隔真菌丝，临床医生应结合病人临床情况完善相关真菌检查。
5．临床医师根据痰标本革兰染色中白细胞与上皮细胞的比例，评价痰标本的质量从而进一步评估痰标本中检出的菌体的临床价值。
6．伤口和脓肿物标本涂片的革兰染色结果可提供给临床医师初步的信息，根据提示的信息可开始抗生素的经验治疗，实验室技术人员可根据涂片提示的信息选择特殊的培养基及特殊的培养条件。
【实验的局限性】
对于一些细小的细菌如军团菌，布氏杆菌，巴尔通体，幽门螺杆菌，弯曲菌等或某些真菌其培养物或直接涂片Gram染色不典型或根本不着色。如临床需要应考虑其他的染色方法或检查方法。
在低倍镜下评价痰标本质量的方法见表10-1。在涂片中如有柱状上皮细胞不应记数于鳞状上皮细胞中，应注明其数量，作为合格标本对待。
表10-1 痰标本显微镜检查的分类
注：分类中1-3类不需做培养，要求重新留取标本；4、5类为合格标本；6类为气管穿刺液时，如未见WBC，而鳞状上皮细胞＞10／低倍镜，也应重新留取标本
（王 澎 徐英春）
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