抗酸染色是微生物实验室中最常用的染色方法之一。萋-尼染色法（冷染法）。分枝杆菌因其菌体之表面有一层类脂或脂质皮膜不易着色，但一经着色后，酸或乙醇的作用不容易把它脱色。所以经抗酸染色后分枝杆菌为粉红色，其他细菌和背景为淡蓝色。
【测定方法】
1．标本涂片，固定，进行抗酸染色。
2．显微镜油镜观察。抗酸菌正常形态为细长微弯曲，两端钝圆的杆菌，镜下可见集聚成团状，常呈分枝状排列，无芽胞、荚膜及鞭毛。抗酸菌为粉红色，其他细菌及细胞呈为蓝色。除菌型为杆状菌外，在染色标本上也可见到细长丝状、串珠状、球形及颗粒等。其发育分为五个阶段：滤过型、颗粒、球菌、短杆菌及成熟杆菌。
【结果判定】
正常人标本涂片的抗酸染色结果为阴性。
【临床应用价值】
1．临床标本直接的抗酸染色。痰、分泌物、胸腔积液、腹水、脑脊液等可进行标本的直接涂片抗酸染色。根据涂片抗酸染色的结果来进行临床诊断。
2．方法的局限性。对于取材不够理想，或者菌量太少，或是抗结核治疗过程中取材常出现假阴性的结果。
3．阳性结果只能提示分枝杆菌感染，但是并不能说明就是结核分枝杆菌感染。如果还想为进一步治疗获得更多的实验室依据，还需要进一步做分枝杆菌的培养和鉴定以及体外药敏试验，具体情况还需要结合临床实际情况。值得强调的是，在进行分枝杆菌培养时应至少区别是快生长分枝杆菌和慢生长分枝杆菌。通常情况快生长的分枝杆菌对经典的抗结核药物常常是耐药的。
【实验的局限性】
1．抗酸染色不是只对分枝杆菌具有特异性，对于某些其他菌也具有不同程度的抗酸性，如奴卡菌，马红球菌，麦氏军团菌，隐孢子菌的包囊等。
2．抗酸染色不能鉴定结核分枝杆菌杆菌和非结核分枝杆菌。
3．抗酸染色涂片缺乏敏感性。与培养相比敏感性范围从22%～78%不等。尽管慢生长的分枝杆菌如结核分枝杆菌都具有抗酸性，但是快生长的分枝杆菌抗酸性可变，甚至是阴性，尤其是当荧光染色时。另外，抗酸染色阴性也不能除外分枝杆菌感染。当痰标本的分枝杆菌的数量在5 000～10 000／ml的菌量时，培养可以检测到10～100的分枝杆菌。
（王 澎 徐英春）
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