（一）动物模型的建立
1%阿托品，复方托品酰胺散瞳至8 mm直径。复方噻胺酮（20 mg/kg）全麻下，耳静脉注射孟加拉玫红（rose bengal，RB）50 mg/kg，注射后以间接眼底镜为光源，距兔眼25 cm，与视轴成45°，照射面积3DD直径，照射鼻侧视网膜脉络膜血管，持续6 min。所有动物在同一条件下，照射相同部位和时间。
（二）动物分组
缺血对照组：n=30，分5个时间点（1 h、1 d、3 d、7 d、14 d，n=6）
治疗组：CA组（1 ml）、TZL组（12.5 mg/m1）NS对照组（1 ml）n=36，每组12只眼。
（三）观察指标
1．观察缺血后眼底像及FFA。
2．ERG、OPS。
3．治疗前后缺血区视神经及视网膜光、电镜检查。
4．缺血组织的cAMP和cGMP的检测。
（四）结果
1．眼底像、FFA 缺血1 h，光照区视网膜水肿（图11-8）。
FFA显示光照区视网膜脉络膜血管狭窄或部分阻塞，阻塞血管周围有大面积的荧光渗漏。缺血3 d视网膜水肿消退，阻塞的视网膜血管部分或完全再通，脉络膜血管为非灌注。缺血7～14 d视网膜血管完全通畅，留下缺血性脉络膜病变。FFA视网膜血管完全再通，无渗漏，脉络膜血管无荧光遮挡和非灌注区（图11-9）。
图11-8 光化学诱发缺血模型
左上正常眼底；右上缺血1 h光照处血管阻塞。左下缺血3 d阻塞血管部分再通；右下缺血7 d视网膜血管完全再通
图11-9 光化学诱发缺血模型FFA
光照1 h视网膜脉络膜血管阻塞，其周围高荧光渗漏；光照3 d视网膜脉络膜血管非灌注；光照7 d视网膜血管再通，脉络膜血管不通；光照14 d视网膜、脉络膜血管全通
2．ERG变化 缺血后1 h，a、b波幅值下降，分别为正常的42.4%和57.4%，缺血1 d，a波降为37.3%，b波不再继续下降，这种a、b波幅值的降低持续3 d，7～14 d恢复至正常（表11-6，表11-7）。
CA治疗3 d，a波恢复为正常的68.5%，b波为76.9%，虽未达正常值，但比对照组恢复快，差异显著P<0.05。治疗7d，a、b波波幅值均恢复正常。
TZL治疗组：除治疗3 d，a波波幅值与对照组比差异显著P<0.05，余各时间点差异均不显著。至于b波各时间点与对照组差异均无显著意义。
CA与TZL两治疗组a、b波比较：TZL除缺血3 d与CA组a波无差异外，7、14 d差异显著P<0.05，至于b波，TZL各时间点均与CA组差异显著P<0.05（表11-8）。
表11-6 缺血后ERG a波波幅的变化（x±s）／μV
正常值38.31±6.41；与正常值比△；与NS比*
表11-7 缺血后ERG b波波幅的变化（x±s）／μV
正常值162.07±13.96；与正常值比△；与NS比*；与TZL+比
表11-8 缺血后OPS振幅的变化（x±s）／μV
正常值229±19.57；△与正常比；*与NS比；+与TZL比
（五）病理观察
1．光镜所见 缺血后1 h，视网膜血管腔阻塞，有大量红细胞堆积和细胞碎屑。色素上皮和外节紊乱。缺血1 d，视网膜血管仍有阻塞。缺血3 d，阻塞的视网膜血管部分再通，脉络膜毛细血管仍然阻塞，缺血7～14 d，视网膜和脉络膜血管再通（图11-10，图11-11）。
2．透射电镜所见 缺血1 h，视网膜、脉络膜血管内皮细胞严重损伤，色素上皮损伤线粒体空泡化。缺血7～14 d，血管内皮细胞增大向腔内突出，提示有内皮细胞增生（图11-12，图11-13）。
CA治疗组：治疗7～14 d，外节基本恢复正常；而TZL治疗组此时的外节有碎片和色素上皮紊乱（图11-14）。
（六）cAMP和cGMP含量测定（图11-15）
1．cAMP含量变化 缺血后1 h，视网膜组织cAMP含量升高，达最高峰P<0.05，1 d降为正常，持续7 d以后进一步降低。P<0.01。见表11-9，表11-10。
（1）CA治疗组：各时间点降低明显与TZL比较P<0.01。
（2）TZL治疗组：治疗后1 d，cAMP含量与NS组比较降低P<0.05，随治疗时间延长3、7 d，cAMP含量不再降，与NS比无显著差异，但14 d，cAMP升高显著，而NS已降低明显P<0.01。
图11-10 光化学诱发缺血模型光镜下视网膜病理改变
图11-11 CA、TZL、NS治疗14 d光镜下视网膜病理改变
CA治疗14 d视网膜外节水肿消，排列较有序；TZL治疗14 d视网膜外节水肿，排列紊乱；NS治疗14 d视网膜外节水肿消，排列也较有序
图11-12 光化学诱发缺血视网膜外节透射电镜下的改变
缺血1 d，电镜下视网膜外节碎裂，盘膜紊乱
图11-13 光化学诱发缺血脉络膜毛细血管阻塞透射电镜下的改变
缺血后1 d脉络膜毛细血管管腔阻塞有血小板黏附积聚，红细胞和细胞碎屑，色素上皮损伤，线粒体空泡化，有许多管样结构（EM×8 000）
图11-14 光化学诱发缺血不同治疗透射电镜下视网模的改变
CA治疗7 d视网膜外节盘膜排列有序；TZL治疗14 d视网膜外节盘膜排列较有序；CA治疗7 d外节，盘膜再生，排列较规则（ME×12 000）；妥拉唑啉治疗14 d外节再生明显盘膜排列较规则（ME×8 000）
图11-15 光化学诱发缺血不同治疗cAMP及cGMP测定曲线
CA治疗组cAMP降低明显，与TZL比P<0.01
表11-9 缺血后cAMP动态变化（pmol/mg）n6
注：正常值0.498±0.13
表11-10 药物治疗后各时间点cAMP变化（pmol/mg）n6
注：与TZL比+
2．cGMP含量变化 缺血后1 h，cGMP含量无变化。1 d，cGMP升高P<0.01，3 d，降至正常范围，7 d、14 d升高，高于正常值（7 d差异不显著t=2.29；P>0.05；14 d P<0.05），见表11-11。
药物治疗组cGMP变化，治疗1 d，cGMP均升高，3 d、7 d、14 d各组cGMP含量变化无显著差异。但NS、TZL组cGMP均有降低波谷，前者出现在3 d；后者在7 d。见表11-12。
本实验提示：
（1）此模型制作简单、方便、易推广。有利于缺血性眼病的研究。
（2）ERG是光刺激视网膜后记录的一簇电反应。它综合反映了视网膜功能状态。本研究是部分局限性视网膜脉络膜缺血，ERG表现为b波振幅迅速降低。目前普遍认为b波产生于Müller细胞，缺血影响细胞内外离子代谢紊乱，发生线粒体和细胞质肿胀。a波产生于光感受器细胞，缺血后a、b波幅值降低仅持续3 d，7～14 d均恢复正常。CA治疗组不论a、b波和Ops均比TZL组恢复快。
表11-11 缺血后cGMP动态变化（pmol/mg）n6
正常值0.524 1±0.036
表11-12 治疗后各时间点cGMP动态变化（pmol/mg）
与正常比△；与NS比*；与TZL比+
（3）cAMP参与肾上腺素能神经传递，在翻译水平调节许多特殊功能的蛋白合成。如酪氨酸羟化酶，该酶控制儿茶酚胺、多巴胺和去甲肾上腺素的生物合成。Segal等提出自主活动与中脑纹状体酪氨酸羟化酶之间成反比关系的假说。得到了Skoluick和Daly等的近交鼠实验的支持。
即：cAMP↑→酪氨酸羟化酶↓→儿茶酚胺、肾上腺素合成↑；
CAMP↓→酪氨酸羟化酶↑→儿茶酚胺、肾上腺素合成↓。
CA治疗组：治疗后cAMP持续下降，血管张力下降，有利于缺血的恢复；TZL治疗后3 d，恢复正常，持续7～14 d则高于正常值。cAMP升高，使酪氨酸羟化酶活性降低，儿茶酚胺、肾上腺素合成增加。使血管紧张度增高，不利于缺血组织的恢复。
cGMP参与视网膜感光细胞的代谢和功能调节。视网膜干细胞外节含有丰富的cGMP和它的代谢酶。缺血、缺氧对组织的cGMP的影响很小。
缺血后视网膜cGMP降低。CA治疗组的cGMP始终稳定在高于正常范围，无明显波动。有利于光在视网膜内的传递，维持视网膜的生理功能；TZL治疗组和对照组均有缺血后的cGMP降低，不利于视网膜生理功能的维持和感受器细胞神经冲动的传导。
研究表明：cAMP参与肾上腺素能神经传递，cGMP参与胆碱能神经传递。
本研究各项实验结果提示：CA治疗优于TZL。TZL对视网膜脉络膜缺血早期应用有害无益。
（实验于1993年6月，任晓鸥，宋琛）
此外，对复方樟柳碱及其成分——樟柳碱和普鲁卡因对缺血性视网膜脉络膜cAMP变化也进行了实验对比研究。
普鲁卡因一直用其阻断神经冲动的传导作为局部麻醉用；对其能使血管壁平滑肌松弛，小动脉扩张，影响生物膜上钙离子活动，调整中枢等未被重视。复方樟柳碱的药效学已有报道，但普鲁卡因对眼缺血的治疗却未见报道。为此，针对普鲁卡因对缺血性视网膜脉络膜cAMP变化进行了实验研究。
动物模型制备：同上。
分组与治疗：正常组、NS组、2%普鲁卡因（PR）组、0.05%樟柳碱（AS）组及CA组，每组4只眼，各1 ml注射于耳后凹陷处皮下，双侧交替1/d，共14 d。结果见表11-13。
表11-13 缺血后治疗14 d各组cAMP含量（pmol/mg）
正常值12.35±0.02；方差分析：F=52.83 P=0.000 1；*与NS比P<0.01；#与CA比P<0.01；PR与AS比，无显著差异
实验结果：提示CA治疗14 d，cAMP含量最低（此现象与任晓鸥实验的规律一致），其次为PR、AS，后两者与CA、NS比较，均为P<0.01，而PR与AS比，则差异不显著。故AS不如CA；CA比AS优越的关键在于PR对眼缺血也有缓解血管痉挛（降低cAMP）的作用。[本实验发表于中国实用眼科杂志，1999,17(12):719．林星石，宋琛]
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