快速反应蛋白测定

C反应蛋白于1930年发现，是一种能与肺炎球菌C多糖体反应形成复合物的急性时相反应蛋白。定量测定血清中CRP的含量，对辅助诊断细菌感染、鉴别细菌与病毒感染等有重要的临床意义。CRP是人类最重要的急性期反应蛋白，急性期浓度可升高上千倍。其由肝产生，由5个相同的亚基依靠非共价键形成的环状五聚体。低等动物同样存在CRP，如在鲎、河蚌等中也曾被发现，但并不一定发挥急性反应蛋白的作用。CRP特征反应是能在钙离子存在的条件下特异性结合磷酸胆碱基团，激活补体和细胞受体，诱使吞噬细胞增多，加强炎症部位吞噬细胞的数量和功能，可使细菌易被吞噬。而酶抑制物能保护周围组织免受吞噬细胞所释放酶的破坏。

CRP是人类急性反应蛋白，没有特异性，目前已经作为医院常规检测项目，可以在很多疾病诊断上作为辅助判断依据。另外，越来越多的证据表明CRP不仅是炎症标志物，并且本身直接参与炎症过程。最近（2006年）有研究发现，CRP是糖尿病病人患冠心病的独立危险因素。2006年《Nature》报道英国Mark B．Pepys领导小组设计新药1，6-双磷酸胆碱-乙烷可抑制CRP对人体损伤，降低心脏病风险。CRP的临床意义与血沉相同，但不受红细胞、Hb、脂质和年龄等因素的影响，是反映炎症感染和疗效的良好指标。类风湿活动期CRP明显增多，与血沉增快相平行，但比血沉增快出现得早、消失也快。CRP含量愈多，表明病变活动度愈高。炎症恢复过程中，若CRP阳性，预示仍有突然出现临床症状的可能性；停用激素后，已转阴的CRP又阳性时，表明病变活动在继续。炎症缓解期和用抗风湿药后，转阴或消失比血沉快，且在贫血和心力衰竭时不像血沉那样易受影响。

在急性事件如机体发生损伤时，血浆CRP浓度在6h后上升，48h达到高峰，大约24h后下降。因而在急性事件发生大约3d内测试可以指示是否有炎症存在。尽管CRP有时上升是轻微的，但它总可以提示病变的存在。例如吸烟者和马拉松运动者可以有足够的组织损伤和炎症导致CRP水平一个微小的上升。正常的CRP水平并不能排除轻度急性、局部炎症或一些慢性疾病［如红斑狼疮（SLE）、进行性全身性硬化症、皮肌炎和溃疡性肠炎］的存在。

CRP的上升程度能反映炎症组织的范围或活动力，其可能继发于基本的疾病，如心肌梗死、恶性肿瘤或类风湿关节炎。在很多疾病中血浆CRP的改变早于临床症状，在各种情况下，连续测定比单个测定可提供更多的信息，因为CRP宽广的参考阈值意味着即使一个个体CRP水平发生10倍的变化，该值仍可保持在正常范围内。CRP分析是将来发展中一个很重要的领域，但试验方法要求比现在常用的测定方法更为敏感及必须与临床结合来解释。CRP值可用来监测高危患者的并发感染，如做连续测定，甚至能发现由于炎症有关联的一些内在情况而先前发生的CRP升高，如手术或细胞毒素治疗后。用来解释其他一些如深静脉血栓形成和肺栓塞引起的急性时相反应是必不可少的。尽管有些限制，但CRP的测定仍很有价值。

细菌的内毒素是急性时相反应的最有效的刺激。所以最高水平的CRP可发生在革兰阴性菌感染时，有时高达500mg／L。革兰阳性菌感染和寄生虫感染通常引起中等程度的反应，典型的是在100mg／L左右。病毒感染引起的反应最轻，通常不超过50mg／L，极少超过100mg／L。病毒和细菌性疾病常常可通过CRP升高的程度加以区分。例如，在脑膜炎和呼吸道感染中，CRP值＞100mg／L，就很有力地证明是细菌性原发感染。CRP对于鉴别诊断细菌还是病毒感染，监测疾病的活动情况和严重度，以及观察治疗效果有很好的指导作用。特别是对抗生素的合理应用有提示性作用。

CRP的检测在20世纪80年代以前作为炎症和组织损伤的非特异性标志物已经广泛应用于临床。但由于过去CRP的检测方法较为落后，假阳性和假阴性很高，影响了它在临床上的价值，而逐渐被临床所忽视。近年来，由于检测技术的更新，测定CRP的快速、简便和可靠的方法已迅速建立，使CRP在临床应用领域大大增加。其在医学上的价值正得到广泛验证和认可。

【检测原理】　利用固相免疫双抗体夹心法原理，稀释后的样品加样于反应板，标本流过反应膜，CRP分子即被固定于膜的CRP特异性单克隆抗体所捕获，然后和随后加入的胶体金抗体缀合物相结合，未结合的金标抗体用洗涤液将其从膜上清除，膜下滤纸层将吸收过剩的液体。当标本中CRP达到病理水平时，膜上将出现紫红色，颜色的强度和CRP浓度成正比，用Nyco Card READERⅡ金标定量仪即可做定量测定。

【适应证】

1．区分细菌和病毒感染。

2．对疾病动态过程进行监测。

3．观察抗生素治疗效果。

4．并发感染的预测。

【标本采集】　全血、血清或血浆。

【操作方法】

1．标本稀释　加5μl血标本或质控品到含有R1稀释液的试管中，盖紧试管并充分混匀10s。注意：避免毛细吸管中有气泡，毛细吸管外有过剩样品。

2．加样　加入50μl稀释的血样本或稀释的质控品于反应板。使稀释的样本渗入反应膜（约30s）。注意：反应膜避免接触气泡，移液管不要接触反应膜。

3．加R2缀合物　加1滴缀合物于反应孔。让缀合物渗入反应膜（约30s）。注意：滴瓶头应当垂直，并在试验孔上方约1cm。

4．R3洗涤液的应用　加1滴洗涤液于反应孔。让洗涤液渗入反应膜（约20s）。注意：滴瓶头应被垂直握着，并在试验孔上方1cm。

5．结果判读　应用Nyco Card READERⅡ定量仪在5min内读取结果。注意：使用Nyco Card READERⅡ定量仪时，检测全血标本用全血模式，检测血清、血浆或质控标本用血清（血浆）模式。

【参考范围】　＜10mg／L。

【临床意义】

1．CRP作为急性时相蛋白在各种急性炎症、组织损伤、心肌梗死、手术创伤、放射性损伤等疾病发作后数小时迅速升高，并有成倍增长之势。病变好转时，又迅速降至正常，其升高幅度与感染的程度呈正相关。

2．CRP与其他炎症因子的相关性。CRP与其他炎症因子如白细胞总数（WBC）、红细胞沉降率和多形核白细胞等具有密切相关性。CRP与WBC存在正相关。在炎症反应中起着积极作用，使人体具有非特异性抵抗力。在患者疾病发作时，CRP可早于WBC而上升，恢复正常也很快，故具有极高的敏感性。

3．CRP可用于细菌和病毒感染的鉴别诊断。一旦发生炎症，CRP水平即升高，而病毒性感染CRP大都正常。脓毒血症CRP迅速升高，而依赖血培养则至少需要48h，且其阳性率较低。又如CRP能快速有效地检测细菌性脑膜炎，其阳性率达99%。

4．恶性肿瘤患者CRP大都升高。如CRP与AFP的联合检测，可用于肝癌与肝良性疾病的鉴别诊断。CRP测定用于肿瘤的治疗和预后有积极意义。手术前CRP上升，手术后则下降，且其反应不受放疗、化疗和皮质激素治疗的影响，有助于临床评估肿瘤的进程。

5．CRP用于评估急性胰腺炎的严重程度。当CRP高于250mg／L时，则可提示为广泛坏死性胰腺炎。

【局限性】　用肝素、枸橼酸钠或EDTA作抗凝剂不影响试验。增高的胆红素水平、脂类或类风湿因子（RF）不影响试验的结果。白细胞数太高（＞40×109／L）或巨球蛋白的存在都可导致假阳性结果，当血细胞比容大于40%时，应该加以校正。

【方法学优点】

1．操作简便、快捷、准确，仅需2min出结果。

2．特异性强，在试验中应用了抗人CRP的特异性单克隆抗体，类风湿因子、脂类等没有干扰。

3．末梢血、静脉全血或血清、血浆均可用于检验。