沙眼衣原体抗原检测

衣原体（chlamydia）是一类能通过滤菌器、严格细胞内寄生，既不同于细菌也不同于病毒，并有独特的繁殖周期的原核细胞型微生物。

衣原体与细菌的主要区别是其缺乏合成生物能量来源的ATP酶，也就是说衣原体自己不能合成生物能量物质ATP，其能量完全依赖被感染的宿主细胞提供。因此只有细胞培养和鸡胚培养才能进行衣原体培养。

衣原体属分为三个种：沙眼衣原体、鹦鹉热衣原体和肺炎衣原体。沙眼衣原体又分为沙眼、性病淋巴肉芽肿和鼠型三种生物变种。前两种生物变种自然宿主都是人，分别感染眼、生殖道、呼吸道和淋巴结，鼠型在鼠间传播。

衣原体有独特的生活周期，以两种发育类型存在：原体（elementary body）是衣原体胞外存在型，圆形，直径0．25～0．35μm，中央有一致密的拟核，有感染力。当原体进入易感宿主细胞后，原体转变为0．5～1．0μm大小的网状体（reticulate body）或始体（intial body），代谢活跃的网状体具有复制能力，为宿主细胞内的繁殖型，不能在细胞外存活，无感染性。

衣原体与易感宿主细胞表面的特异受体吸附后，通过吞噬作用进入细胞内，形成吞噬小泡。原体在泡内细胞壁变软，增大形成网状体，RNA增多。约8h后，进行二分裂增殖，在细胞膜包裹的空泡内聚集、扩增，称为包涵体（inclusion bodies）。有空泡的网状体再浓缩形成具有坚韧细胞壁的原体。细胞破裂释放出具有感染性的原体，可以感染其他细胞，该发育期需要48～72h。

沙眼衣原体耐冷不耐热，56～60℃仅存活5～10min，在-70℃可保存数年。0．1%甲醛液、0．5%苯酚30min可杀死。75%乙醇0．5min可杀死。对四环素、红霉素、螺旋霉素、多西环素及利副平均很敏感。

沙眼衣原体感染除性传播途径外，还可以通过日常生活接触感染。如手、眼或病人污染的衣物、器皿等媒介物，或胎盘、围产期传播等。

沙眼衣原体的预防：①杜绝性乱是对沙眼衣原体感染最主要的预防措施。②要注意个人卫生：个人毛巾独自使用；不穿借别人的内衣、泳衣，外出期间不在盆、塘洗澡。③配偶患沙眼衣原体感染期间要禁止性生活。治疗应在夫妻之间同时进行，妇女患病可能没有明显症状，不要因为没有症状就拒绝治疗而成为隐性传染者。④孕妇如果感染沙眼衣原体可以用红霉素治疗。治疗后复查，确认治好后才能从阴道分娩。

沙眼衣原体的实验室检查包括①一般细胞培养：只能检测活的衣原体，其特异性可达100%，但是其费时，最早也要3～4d出结果；②免疫荧光试验：主要用沙眼患者的眼结膜刮取物、性淋巴结肉芽肿患者宫颈拭子直接涂片，用荧光显微镜检查；③补体结合试验和PCR方法也可用于沙眼衣原体的实验室检查，但上述方法需要特殊的仪器和设备，不适合作为POCT的方法检测沙眼衣原体；④免疫层析法检测：衣原体脂多糖（LPS）抗原是直接检测女性宫颈拭子、男性尿道拭子或尿液标本中的沙眼衣原体抗原，可满足临床快速诊断衣原体感染的需求。

【检测原理】　从标本中提取LPS抗原并将提取物加样到反应板的圆形窗口，标本中可能存在的LPS抗原与过量的胶体金标记的鼠抗LPS单克隆抗体形成免疫复合物，免疫复合物与过量的胶体金标记抗体通过毛细作用迁移至反应板的椭圆形窗口。在椭圆形窗口靠左边部分，兔抗衣原体多克隆抗体能将免疫复合物固定，产生粉红色线条。该反应板含质控线以证实测试是否准确进行：过量的抗LPS抗体会继续迁移至椭圆形窗口的右边部分与羊抗鼠抗体反应产生粉红色线条。

【适应证】　不育不孕门诊、性病门诊、婚前检查、妇科检查和流行病学等沙眼衣原体的检测。

【标本采集】

1．因为活的或死的沙眼衣原体均可被检测出来，所以采集标本时不需使用任何运输培养基。采集标本时不要用藻酸钙拭子或棉拭子；不要用含琼脂、药用炭（活性炭）、明胶或血清的任何一种运输培养基。拭子或细胞刷于2～8℃可保存72h，不要冰冻。

2．男性尿道标本的采集。采集标本前1h禁止小便。将拭子插入尿道口内3～4cm，在慢慢抽出的同时旋转拭子以便刮拭尿道壁，最大量地采集细胞。

3．女性标本的采集。宫颈内标本：采集标本前先去除黏液和子宫颈外的分泌物以提高宫颈内细胞的采集质量，并减少细菌的污染以获得更好的结果，然后在宫颈内壁采集细胞。尿道标本：患尿道炎则采集尿道标本。

【操作方法】

1．抗原提取　向注明标本号的抗原提取试管中滴加18滴（0．9ml）抗原提取液，将拭子放入试管，在提取液中激烈旋转挤压拭子10s。将抗原提取试管放在试管架上室温放置10～15min；在此期间，将试管用力振摇2～3次，每次将拭子贴在试管壁挤压几秒钟。然后用拇指和示指挤压抗原提取管中的拭子，液体挤干后将拭子弃去。这种抗原提取后的液体于室温放置30min不会对检测结果产生不利影响。

2．检测　从包装袋中取出反应板置水平桌面上，然后将过滤滴头插入抗原提取试管中，向反应板的圆形窗口滴加7滴抗原提取后的液体，在室温下让其迁移。液体加入后10～20min观察结果，读取结果后5min内颜色可保持不变。

【结果判读】

1．内置质控　椭圆形窗口的右边部分出现一条粉红色线条，则证明试验的操作正确。无粉红线出现，则此次检测无效，这可能是归咎于错误的操作或试剂过期。出现此类情况重复再测试一次。

2．阳性结果　椭圆形窗口的左边部分若内置质控已证实测试有效，椭圆形窗口的左边部分也出现一条粉红色线条，证明此标本中含有衣原体LPS抗原，虽然这根粉红色线条可能比质控线淡或有所不同。

3．阴性结果　椭圆形窗口的左边部分没有出现一条粉红色线条，表明此标本中不含衣原体LPS抗原或所含衣原体LPS抗原的水平没有达到本试剂盒能检测出来的程度。

【临床意义】　沙眼衣原体除引起沙眼外，还是一种很常见的性传播疾病。沙眼衣原体可以导致许多生殖道疾病，其感染率已超过淋病，成为全球居于首位的性传播疾病。沙眼衣原体是引起非淋球菌性尿道炎和青霉素治疗后的后淋球菌性尿道炎最常见原因。沙眼衣原体进入生殖道后，喜欢进入黏膜细胞内生长繁殖，在女性引起子宫内膜炎、输卵管炎、盆腔炎、尿道炎等。在男性可引起尿道炎、附睾炎、直肠炎等炎症。女性感染沙眼衣原体，会引起不孕、异位妊娠（宫外孕）、流产、死胎、胎膜早破、早产等。

【局限性】　本方法只能用于宫颈内标本和尿道标本衣原体脂多糖抗原的检测，其他标本（如尿液、精液和眼结膜）尚不适用。样品中有过量的黏液或血液会影响实验，有可能造成假阳性结果。该试剂不能分辨出病原体的生物活性，对于活性和非活性的抗原，两者检测效果是相同的。

【方法学优缺点】

1．优点　①测试方法简单、快速、无需复杂的仪器设备，可单人操作，尤其适用临床实验室及床边检测。敏感性为93%，特异性为99%。②无活性的沙眼衣原体也能检测出抗原，因此对样本运送的要求不像细胞培养那么高。

2．缺点　①样本中需要足够数量的沙眼衣原体抗原，否则可能出现漏检；②在试验阴性结果时，不能完全排除沙眼衣原体感染，有可能是沙眼衣原体数量不足或样本采集不当的缘故。