DNA作为自身抗原有若干决定簇,只有抗碱基对DNA的自身抗体,如抗dsDNA抗体、抗单链新折叠片段的自身抗体才与风湿性疾病有关。抗双链脱氧核糖核酸(double-stranded DNA,ds-DNA)抗体又称天然DNA抗体,与系统性红斑狼疮的发病密切相关,其在细胞核的反应点位于DNA(外围区)的脱氧核糖核酸框架上。
【检测原理】 本试验是利用酶免疫斑点技术来检测抗体。抗原以分散的点状形式被固定在固相膜上,当标本的抗体与固定在测试条固相膜上的测定抗原结合后,去除非特异的结合物质,再加入结合有碱性磷酸酶的抗人抗体固定的人抗体进行反应,产生容易观察、明显的蓝紫色斑点。
【适应证】 可用于系统性红斑狼疮(SLE)和干燥综合征(SS)、进行性系统性硬化病(PSS)、多发性肌炎/皮肌炎(PM/DM)、混合性结缔组织病(MCTD)、类风湿关节炎(RA)等自身免疫疾病的诊断和鉴别诊断。
【标本类型】 血清。
【试验操作】
1.预备
(1)设置好恒温仪温度。
(2)放入反应管。
(3)在第一个反应管中加入2ml稀释液(1#);在第二个反应管中加入2ml增强液(2#);在第三个反应管中加入2ml结合液(3#);在第四个反应管中加入2ml发展液(4#)。
(4)预热10min。
2.试验步骤
(1)反应管中加入血清10μl。
(2)测试条在清洗杯中预湿30~60s。
(3)将测试条插入反应管1#,混合,放置5min。
(4)取出测试条,放入清洗杯,来回运动5~10s。
(5)将测试条插入反应管2#,混合,放置5min。
(6)取出测试条,放入清洗杯,来回运动5~10s。
(7)将测试条插入反应管3#,混合,放置15min。
(8)取出测试条,放入清洗杯,来回运动5~10s后放置5min。
(9)将测试条插入反应管4#,混合,放置5min。
(10)取出测试条,清洗杯中清洗,显色并干燥,判断。
【结果判读】
1.阳性 在膜孔中心可见一个清晰而且界限清楚的斑点,膜孔外的周边色必须是白色或灰白色的。
2.阴性 看不见显色斑点或斑点很浅不易看见。
【参考范围】 阴性。
【临床意义】 抗dsDNA抗体是SLE的诊断标准之一,特异性>90%,且其效价随疾病的活动和缓解而升降(活动期SLE抗dsDNA抗体阳性率为80%~90%;非活动期<30%),可用于监测SLE的病情变化及疗效。
【局限性】 检测结果阴性不能排除自身免疫病。没有一个筛选试验能够包含所有可能的核抗原。自身免疫病要结合临床流行病学及实验室资料来诊断。
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