近年来,国内已广泛开展乳腺癌手术标本组织切片免疫组化的性激素受体检测,但对于未经手术的乳腺癌患者针吸涂片的性激素受体检测却很少开展。余小蒙等(1998年)对此项工作进行了探索,取得了较满意的结果。
材料和方法:对有乳腺肿物乳腺癌的患者,常规皮肤消毒,用10ml注射器经皮刺入肿块,保持负压改变方向,进退6~10次,以便获得更多的抽吸物,涂片4~8张。选择含血量少质量好的涂片2~4张,进行免疫组化染色性激素受体检测(SHRS)。其余的涂片行HE染色供细胞学诊断。
(一)细胞涂片免疫组化标记过程
1.将涂片分别用冷丙酮(-10℃)、冷甲醇(-10℃)、95%乙醇、3.7%甲醛PBS固定液固定15min。
2.将固定后的涂片装入木盒内,用蔗糖-甘油保存液封固。再放入低温冰箱(-20℃)内分别保存5d或25d以内,再进行标记。
3.将涂片用1%过氧化氢甲醇溶液处理15min,进行标记。
4.将ER、PR工作液(一抗)按1∶1稀释后孵育涂片,进行标记。
5.将加入一抗后的涂片分别置入20~25℃室温中或4~6℃冰箱中孵育8h进行标记。
(二)SHRS的单克隆抗体免疫组化染色及对照完成免疫组化染色
试剂盒由美国公司提供,包括一抗、鼠抗人ER-1DS和PgR-1A;桥抗:生物素标记的羊抗鼠IgG;SP:辣根过氧化酶标记的链霉亲和素。阳性对照用已知ER和PR表达阳性的乳腺癌组织石蜡切片,阴性对照用ER和PR表达阴性横纹肌组织石蜡切片,空白对照用TBS缓冲液代替一抗,在已知的ER和PR表达阳性的乳腺癌组织石蜡切片上完成。
(三)SHRS阳性细胞表达及检测结果分析判断
1.在光镜下细胞涂片与切片内SHRS的单克隆抗体阳性表达细胞的特征完全相同,即特异性棕黄色颗粒着色位于细胞核内,而不存在胞质中。阴性表达细胞的核呈灰蓝色。
2.检测结果的判断:FNAC涂片连续计数200个细胞,组织切片连续计数500个细胞。遇到重叠而未展开的癌细胞团,正常导管上皮细胞、间质细胞、组织细胞、各种血细胞及坏死细胞均不应计算在内。根据阳性细胞百分比判断检测结果及阳性细胞<15%检测结果为阴性,>15%检测结果为阳性。检测结果由两人判定。
(四)FNAC涂片SHRS检测注意事项
1.良好的针吸技术,以获得足够量的癌细胞是乳腺癌FNAC涂片SHRS检测成功的首要环节。
2.FNAC材料涂入载玻片后,应用棉棒将多余的血液吸去,然后尽可能将其均匀展开于涂片上,防止因为细胞堆积而影响标记结果。
3.涂片待干后应立即用冷丙酮或95%乙醇固定,不宜用甲醛固定,暂时不用时,应放在-20℃低温冰箱内妥善保存。
4.内源性过氧化酶的处理应采用1%过氧化氢甲醇溶液,不宜用3%过氧化氢溶液。
5.合理使用稀释一抗的工作液(1∶1稀释度),在温室下孵育2h或冰箱(4~6℃)内孵育8h,以便保证标记结果。
国内外文献认为使用单克隆抗体免疫组化法SHRS检测,结果是可靠的。对SHRS检测阳性病人可早期进行内分泌治疗,可获得良好的疗效。
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