一剂量法（校正曲线法）

（一）设计原理与计算公式

本法系用已知效价的标准品溶液制备出校正曲线，并在同样条件下，测出供试品溶液所致抑菌圈直径的平均值后，再求出其与标准品溶液所致抑菌圈直径平均值之差，即可在校正曲线上直接求得供试品溶液的浓度，换算出效价，故称校正曲线法。由于检测供试品效价时，标准品和供试品都采用一个剂量，故也称一剂量法。

由公式（2）可知，抗生素总量的多少受最低抑菌浓度（C）、培养液厚度（H）、扩散系数（D）和细菌生长时间的影响；同时由公式（1）也可看出抑菌圈的大小也受C、H、D、T的影响。所以在效价测定时应消除这些影响，才能得到准确的结果。为消除这些影响，可用相对效价设计法，即用标准品同时作对照测定的方法。其计算方法如下：设标准品的抑菌圈直径为S1；标准品的总量为M。

供试品的抑菌圈直径为T1；供试品的总量为M′。

则　　21＋lg（C·4πDTH）（4）

因lg（C·4πDTH）为截距，在同一双碟上其数值是相等的，因此两式相减时可以消掉并得到（5）为供试品与标准品的效价比对数，令θ为直线的斜率，故供试品与标准品的效价比对数即等于斜率乘供试品的抑菌圈直径的平方值与标准品抑菌圈直径平方值之差。此即管碟法的校正曲线法的基础。

根据上述原理，可知效价的对数值与抑菌圈半径的（或直径的）平方值成直线关系，其直线方程式为lgY＝aX＋b。当供试品与标准品对照测定时，b可消掉，成为lgθ＝a（X′－X），也即效价的对数值等于斜率乘供试品与标准品的抑菌圈直径值之差数。校正曲线测定效价便以此为基础。即：

lg效价＝（斜率）×（供试品抑菌圈直径－标准品抑菌圈直径）

在上式中只要知道斜率，则可求出lg效价。为了消除测定碟间的差异，在每一双碟的加菌培养液上置6枚不锈钢小管（简称小钢管），间隔的3枚内加入标准品的某一特定浓度Ck，它们所产生的抑菌圈直径平均值为yk，另3枚内加入标准品的中心浓度C0，它们所产生的抑菌圈直径平均值为y0。

令　　　　　　　fk＝yk－y0

这样采用的自身对照方法，当某一碟的条件使抑菌圈偏大时，yk和y0就都将按相似的程度偏大，反之亦然。因此fk在碟间的差异必然＜yk在碟间的差异。所以f值亦应与抗生素浓度的对数值（6）呈直线的函数关系。即f＝aX＋b，据此可制备校正曲线。

（二）校正曲线制定与效价测定方法

1．校正曲线制定

（1）中心浓度的选择：根据各种抗生素的对数浓度（剂量）与抑菌圈（反应）关系的直线范围内，先选择一个中心浓度C0，该浓度所致的抑菌圈直径大小适合在16～17．5mm，并容易稀释制备溶液。一般均取整数。

（2）各剂量按等比级数稀释，剂距一般为三种：1∶0．8、1∶0．88、1∶0．85。当中心浓度和剂距确定了以后，应再算出中心剂量邻近的高低2个浓度C0＋1及C0～1。

（3）从试验结果求得各点位置，在半对数坐标纸上，将各点连接得一直线，直线应通过中心点，由各剂量点连成的标准直线应有70%的点在直线上。

2．供试品效价测定　取标准品制备中心浓度的标准液，并取供试品，预估效价后用缓冲液稀释到与标准品的中心浓度相同的供试液。取备妥的放置6枚小钢管的双碟，一般不少于3个，在每一双碟中，间隔的3枚小钢管滴满中心点浓度的标准液，另3枚小钢管中滴满供试液。在规定条件下培养后，测量各抑菌圈的直径。分别求得标准液抑菌圈直径的平均值y0和供试液抑菌圈直径的平均值yk，算出yk－y0的差数（fk）。据此在校正曲线上读取供试液的浓度，即可转换成供试品所含效价U／ml，亦可以代入直线回归方程式，算出供试品的效价。