核酸检测和抗原抗体哪个准确

本节热门考点

1．凝集反应是颗粒性抗原（细菌、细胞等）与相应抗体特异性结合后形成肉眼可见的凝集团块，沉淀反应是可溶性抗原与相应抗体结合，在适当条件下出现肉眼可见的沉淀线。

2．免疫学检测的三大标记技术：酶免疫测定、免疫荧光技术和放射免疫测定。

3．淋巴细胞分离的主要方法：葡聚糖-泛影葡胺密度梯度离心法，磁珠分离法，流式细胞术分离法。淋巴细胞转化的原理和应用。

4．细胞因子的检测：①生物活性测定法；②免疫学测定法，包括RIA和ELISA；③分子生物学法，包括原位杂交法和RT-PCR法。

一、抗体的检测及应用抗体进行的检测

1．概念　指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。根据反应的基本原理与表现主要分为凝集反应、沉淀反应和补体参与的各种反应。

2．血凝抑制　当病毒的悬液中加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或血凝素直接接触，这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为血凝抑制反应。

3．凝集反应和血型的鉴定　凝集反应是指颗粒性抗原（如细菌、红细胞或表面带有抗原的乳胶颗粒）与相应抗体结合，在一定条件下可形成凝集团块的现象。凝集反应分为直接凝集反应和间接凝集反应两种。

ABO血型鉴定，即指ABH血型抗原的检测。红细胞含A抗原的叫A型，含B抗原的叫B型，含A和B抗原的叫AB型；不含A、B抗原，而含H抗原的称O型。

4．免疫荧光　这种以荧光物质标记抗体而进行抗原定位的技术称为荧光抗体技术。

5．放射免疫　放射免疫测定法是用放射性核素标记抗原或抗体进行免疫学检测的技术，检测的敏感度可达pg/ml水平。

6．酶免疫（ELISA和免疫组化）　酶免疫测定（EIA）是将酶催化作用的高效性与抗原抗体反应的特异性相结合的一种微量分析技术。酶免疫测定分为酶联免疫吸附试验（ELISA）和酶免疫组化技术，前者用于测定可溶性抗原或抗体，后者用于测定组织或细胞表面的抗原。

7．免疫电镜　将抗体进行特殊标记后用电子显微镜观察免疫反应的结果。根据标记方法的不同，分为免疫铁蛋白技术、免疫酶标技术和免疫胶体金技术。

8．免疫沉淀　利用抗体特异性反应纯化富集目的蛋白的一种方法。

9．免疫印迹　免疫印迹又称Western blotting，是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。

二、免疫细胞的分离

（一）Ficoll-Hypaque离心法

外周血单个核细胞（PBMC）包括淋巴细胞和单核细胞。PBMC是免疫学实验最常用的细胞，也是进行T、B细胞分离纯化过程的第一步。常用的分离方法是葡聚糖-泛影葡胶密度梯度离心法，其原理是根据外周血中各种血细胞比重不同使不同密度的细胞呈梯度分布。红细胞密度最大，沉至管底；多形核白细胞的密度为1.092，铺于红细胞上，呈乳白色；　PBMC的密度约为1.075，分布于淋巴细胞分层液上面；最上层是血浆。

（二）磁珠分离法

将已知抗细胞表面标记的抗体交联物称为磁珠（平均直径＜1.5μm的磁性颗粒），与细胞悬液反应后，磁珠借抗体结合于相应细胞群或亚群表面。再将细胞悬液加于一试管内并置磁场中，因磁珠被磁场吸引，将磁珠结合的细胞与未结合磁珠的细胞分开。

（三）流式细胞术

是一种集光学、流体力学、电力学和计算机技术于一体，可对细胞进行多参数定量测定和综合分析的方法。基本流程为：将待测细胞悬液与荧光素标记抗体反应后，在压力作用下，细胞排成单列经流动室下方喷嘴喷出形成液滴射流，每一液滴中包裹一个细胞。当液滴射流与高速聚焦激光柬相变，液滴中的细胞受激发光照射，产生散射光并发出各种荧光信号，后者被接收器检测。同时，分选部件将所欲分选细胞赋以电荷，带电液滴在分选器的作用下偏向带相反电荷的偏导板，落入适当容器中，达到分选的目的。流式细胞仪可鉴定荧光抗体单色、双色或多色标记的细胞。同时还能进行细胞周期、细胞凋亡等分析，广泛应用于基础和临床免疫学研究。

三、免疫细胞的特异性、数量和功能检测

（一）流式细胞术

根据表面表达CD分子的种类、水平和多种CD表达格局，以流式细胞术可以二维荧光方图和比例统计显示待测细胞群体中某群CD＋细胞的比例及数量、CD分子表达水平的高低，同时以IFN-γ等细胞因子或Annexin V凋亡标志等，可测定的功能性CTL、凋亡细胞的比例，以FITC等标记靶细胞，通过荧光强度的减弱程度可测定CTL的杀伤活性。

（二）增殖试验

1．H-TdR掺入法　在PBMC中加入PHA共同培养，终止培养前8～15h加入氚标记的胸腺嘧啶核苷（3H-TdR），由于3H-TdR能掺入细胞合成的DNA中，细胞增殖水平越高，掺入的放射性核素越多。培养结束后收集细胞，用液体闪烁仪测定样品的放射活性，反映细胞的增殖状况。

2．MTT法　MTT是一种噻唑盐，化学名3-（4，5-二甲基-2-噻唑）-2，5-二苯基溴化四唑。在细胞培养终止前数小时加入的MTT，作为细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶的底物参与反应，形成紫蓝色的甲臢颗粒并沉积于细胞内或细胞周围。甲臢可被盐酸异丙醇或二甲基亚砜完全溶解，用酶标测定仪测定细胞培养物的OD值，反映细胞增殖水平的高低。

（三）细胞毒试验

是检测CTL、NK等细胞杀伤靶细胞活性的最为经典可靠的细胞学技术。用特异性抗原和细胞因子刺激7d的效应CTL和51Cr标记的靶细胞相互作用4h，被杀伤的靶细胞可释放51Cr，培养上清中的51Cr放射性，可代表效应性CTL的细胞毒活性。其优点是非常敏感、假阳性低；缺点是有放射污染、51Cr半衰期很短且操作复杂、对技术要求很高。近年来，以FACS方法和乳酸脱氢酶（LDH）ELISA方法取代51Cr试验，但缺点是假阳性很高。

（四）细胞凋亡检测

凋亡是一种重要的生理和病理过程，凋亡细胞体积变小，细胞变圆，与周围细胞脱离，失去微绒毛，胞质浓缩，内质网扩张，核仁消失，核染色质浓缩呈半月形或斑块状，出现核着边现象，最后细胞膜内陷将细胞自行分割为多个外有胞膜包绕的凋亡小体。

1．琼脂糖凝胶电泳法。

2．FACS法。

3．TUNEL法。

（五）芯片技术

如蛋白质微阵列，是指固定于支持介质上的大量蛋白质或基因构成的微阵列。根据抗原-抗体特异性结合的原理，可实现快速、准确、高通量的检测。基本原理是将各种蛋白质有序地固定于芯片，再用荧光标记抗体与芯片上对应蛋白质结合，测定芯片上各点的荧光强度可指示对应的蛋白质的含量。芯片技术广泛用于大规模、高通量检测病原体感染后或者特异性抗原刺激后细胞内上调表达的抗原谱。

（六）细胞因子的生物活性检测

根据细胞因子的生物学活性，选用相应的实验系统，包括细胞增殖法、直接杀伤法、保护细胞免受病毒致病变法等。如选用细胞因子依赖的细胞株，其增殖反应水平与细胞因子的含量成正相关，根据细胞株的增殖水平可确定样品中细胞因子（如IL-1、IL-2、IL-4、IL-6等）的含量。

试题精选

欲检测血清中一种微量的小分子肽，下列方法中最敏感的是

A．免疫荧光技术

B．ELISA法

C．双向琼脂扩散法

D．单向琼脂扩散法

E．对流免疫电泳

答案：B