结核杆菌特异性细胞反应检测

痰污染物多,涂片镜检有假阳性,而结核菌培养生长太慢,难以提供及时诊断。尚有众多不排菌的肺结核以及与外界不沟通脏器的结核病不易获得病原学诊断标本,纤维镜检查毕竟需要特殊设备,故长期以来一直积极探索和寄希望于血清学诊断。但结核菌的抗原十分复杂,体液免疫的意义尚不清楚,抗体不仅量微而且种属特异性不易确定。

细胞因子检测:近年来,最受关注的是以酶联免疫吸附测定(ELISA)技术检测病人周围血单个核细胞经特异性抗原[如ESAT-6或CFP-10或ESAT-6-CFP-10(融合蛋白)]刺激后的IFNγ释放试验及以ELISPOT技术检测IFNγ分泌细胞。目前已纯化出多种结核菌抗原,如抗原5(相对分子质量为380 000)、抗原6(相对分子质量为30 000)、脂质阿拉伯聚糖(LAM)、抗原A60,用于检测抗体特异性和敏感性均优于粗抗原PPD,但它们亦非单一特异性抗原决定簇,临床推广应用价值尚待进一步评价。

结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)检查是一种γ干扰素释放分析,用酶联免疫斑点(ELISPOT)检测与6k D早期分泌靶向抗原和10 k D培养滤过蛋白肽段库反应的T细胞以诊断结核感染,具有高度的敏感性和特异性。结核病的免疫是细胞免疫,入侵的结核菌被吞噬细胞吞噬后,经加工处理,将抗原信息传递给T淋巴细胞,使之致敏。当致敏的T淋巴细胞再次接触结核菌,可释放淋巴因子使巨噬细胞聚集,形成结核结节。ELISPOT技术可以检测出(0.1～0.2)×104外周血单个核细胞中经某种抗原刺激后释放某种细胞因子的细胞,经酶联显色后,通过ELISPOT分析系统对斑点进行计数,1个斑点代表1个细胞,从而计算出抗原特异性细胞的频率,并据此结果判断是否感染结核及其严重性。

脂阿拉伯甘露聚糖(lipoarabinomannan,LAM)是一种非蛋白结核分枝杆菌抗原,属特异性抗原,主要存在于结核菌表面,具有较强的免疫原性和抗原性,能够刺激结核菌感染者产生抗体。而其他分枝杆菌由于表面LAM含量低,不能刺激机体产生高水平的抗体量,故抗-LAM的特异性和敏感性都较高,对活动性肺结核,尤其对痰菌涂片阴性肺结核的诊断有较好的价值。

生物蛋白芯片技术检测结核分枝杆菌IgG抗体在临床上主要用于:①活动性结核菌感染引起的疾病特异性抗体检测;②非活动性感染及接受过卡介苗接种者;③涂片、培养检测为阴性的人群检测;④肺部其他疾病的鉴别诊断和结核病化疗后的动态观察。